锌指蛋白 64； ZFP64

锌指蛋白 338； ZNF338

HGNC 批准的基因符号：ZFP64

细胞遗传学位置：20q13.2 基因组坐标（GRCh38）：20:52,084,011-52,191,779（来自 NCBI）

▼ 说明

ZFP64 是一种转录因子，可共激活 Notch（参见 190198）以下调肌原性分化并促进成骨细胞分化（Sakamoto 等人，2008）。

▼ 克隆与表达

Sakamoto 等人使用酵母 2 杂交筛选来鉴定小鼠 Notch1（190198） 胞内结构域（NICD） 的相互作用子（2008）克隆小鼠Zfp64。通过数据库分析，他们鉴定出了小鼠和人类 ZFP64 的 4 个剪接变体。在人类中，这些变体编码亚型 A 至 D，分别包含 681、627、679 和 645 个氨基酸。与其他异构体相比，异构体 D 具有源自基因内基因组复制的独特 C 末端。同工型 A 至 C 具有 9 或 10 个 C2H2 型锌指基序，而同工型 D 有 13 个。同工型 D 包含锌指 7 至 9 的区域具有与 SPF1 转录抑制结构域相似的结构。免疫组织化学分析表明，小鼠 Zfp64 定位于转染的 U2OS 细胞的细胞核。小鼠和鸡胚胎的原位杂交表明，在早期发育过程中，上皮下间充质细胞（包括体节和肢芽）中存在 Zfp64 表达。在后来的发育过程中，Zfp64的表达几乎无处不在，包括真皮基底细胞和真皮上皮下间充质细胞、卫星细胞、成骨细胞、肥大软骨细胞，而在横纹肌中表达较弱。 RT-PCR 分析显示成年小鼠中普遍存在 Zfp64 表达，Northern 印迹分析证实了脑、脾、肝和心脏中的表达。 RT-PCR 证明 ZFP64 在小鼠和人成纤维细胞、肌原细胞、软骨细胞和成骨间充质细胞系中表达。

▼ 基因功能

Sakamoto 等人使用酵母 2-杂交测定、免疫沉淀和蛋白质印迹分析（2008） 证实小鼠 Zfp64 的所有亚型都与小鼠 NICD 的包含 PEST 的区域相互作用。内源性 ZFP64 还与转染的 U2OS 细胞中小鼠 NICD 的 PEST 结构域相互作用。 Western blot分析表明，Zfp64单独表达时定位于细胞核，与NICD共表达时主要定位于细胞质，与NICD和Csl（RBPJ；147183）（一种与NICD相关的DNA结合因子）共表达时主要定位于细胞核。 U2OS 细胞中的荧光素酶和 RT-PCR 分析表明，小鼠 Zfp64 以剂量依赖性方式反式激活 Notch1 靶向 Hes1（139605） 和 Hey1（602953），刺激后 24 小时仍保持 2 倍诱导。该激活与 NICD 的激活相加。染色质免疫沉淀（ChIP）-PCR 分析表明 Zfp64 与 Hes1 和 Hey1 的启动子特异性结合。计算机分析和荧光素酶测定表明，ZFP64 表达是通过 RUNX2（600211） 与人 ZFP64 启动子中的 OSE2 元件的结合来调节的。蛋白质印迹分析显示，小鼠 Zfp64 的表达导致肌节肌节蛋白-α（参见 102610）、平滑肌肌节蛋白（参见 102540）和结蛋白（125660）的减少，并且在 Zfp64 和结蛋白共表达后，肌节蛋白和结蛋白水平进一步降低。 NICD。 Zfp64 表达还抑制 C2C12 细胞中的肌管形成，而 Zfp64 敲除导致 Mef2C（600662） 和 MyoD（159970） 表达增加，表明 Zfp64 阻断肌原性分化。相反，Zfp64 表达增加碱性磷酸酶（ALP; 171760）、Col1a1（120150）、骨钙素（BGLAP; 112260） 和骨桥蛋白（SPP1; 166490） 表达，而 Zfp64 敲低降低这些因子的表达，表明 Zfp64 促进成骨细胞分化。 HDC 细胞的转染实验表明，Zfp64 介导的 Col1a1 和骨桥蛋白（而非 ALP 或骨钙素）的上调是由 Hes1 介导的。

Watanabe 等人使用免疫共沉淀、荧光素酶和 ChIP 测定法（2016） 证明 ZFP64 与 ZNF70（194544） 相互作用，通过与 HES1 启动子结合来上调 HES1 表达。

▼ 测绘

Gross（2018） 根据 ZFP64 序列（GenBank BC041622） 与基因组序列（GRCh38） 的比对，将 ZFP64 基因对应到染色体 20q13.2。

▼ 历史

王等人的文章（2013） 描述小鼠 Zfp64 的表达和功能被撤回。