肝配蛋白受体 EphB2； EPHB2

ELK 相关酪氨酸激酶； ERK
发育调控的 EPH 相关酪氨酸激酶； DRT
EPH酪氨酸激酶3； EPHT3
HEK5

HGNC 批准的基因符号：EPHB2

细胞遗传学位置：1p36.12 基因组坐标（GRCh38）：1:22,710,838-22,921,500（来自 NCBI）

▼ 说明

EPHB2 基因编码跨膜酪氨酸激酶受体。它存在于血小板中，在导致血小板聚集和激活的细胞质信号传导中发挥作用。该受体的配体是肝配蛋白-B1（EFNB1；300035）。

EPHB2 在通过双向信号传导的细胞间接触中以及在没有细胞间接触的情况下都发挥作用，这可能有助于初始血小板激活信号。 EPHB2 的胞质结构域在血小板中 α-IIb（ITGA2B; 607759）/β-3（ITGB3; 173470） 整合素信号传导的调节中发挥作用（Vaiyapuri 等人总结，2015）。

▼ 克隆与表达

Chan 和 Watt（1991） 克隆了编码受体蛋白酪氨酸激酶 EPH 亚类成员的 EEK（EPHA8; 176945） 和 ERK 基因的部分序列。大鼠 RNA 的 Northern 印迹分析表明，编码人 ERK 的 DNA 与肺中转录物的杂交最为丰富。

Ikegaki 等人通过使用单克隆抗磷酸酪氨酸抗体和 5-prime RACE（cDNA 末端快速扩增）程序筛选人胎脑 cDNA 表达文库（1995） 分离出编码属于 EPH 家族的受体型酪氨酸激酶的重叠 cDNA，并将其指定为基因 DRT（发育调节的 EPH 相关酪氨酸激酶）。 DRT 基因以 3 种不同大小（4、5 和 11 kb）的转录本表达。 DRT 转录本在人脑和其他几种组织中表达，包括心脏、肺、肾、胎盘、胰腺、肝脏和骨骼肌，但 11 kb DRT 转录本优先在胎儿脑中表达。中期胎儿中多个组织（包括脑、心脏、肺和肾）中 DRT mRNA 的稳态水平高于成人。池垣等人（1995）表明大量源自神经外胚层的肿瘤细胞系表达DRT转录物。作者推测 DRT 可能在人类神经发生中发挥作用。

Fox 等人的 Northern 印迹分析（1995）揭示HEK5在多种人体组织中以多种大小的转录本表达，其中在胎盘中表达水平最高。

斋藤等人（1995） 从 cDNA 序列证明，ERK 蛋白在推定的酪氨酸激酶结构域上游有一个高度疏水的部分，表明它具有类似受体的跨膜结构。

Cowan 等人使用发育中的小鼠后脑的免疫组织化学分析（2000）检测到Ephb2在中线表达，包括底板和室管膜层。

▼ 测绘

Chan 和 Watt（1991） 通过体细胞杂交体的 Southern 印迹分析将 EEK 和 ERK 基因定位到 1 号染色体。池垣等人（1995） 通过人/啮齿动物体细胞杂交组的 PCR 筛选和荧光原位杂交，将 DRT（EPHB2 基因）定位到 1p36.1-p35。由于1p的远端在神经母细胞瘤中经常被删除，因此DRT基因可能在神经母细胞瘤和小细胞肺癌（SCLC）的肿瘤发生中发挥作用。

通过荧光原位杂交，Saito 等人（1995）证明ERK基因位于染色体区域1p36.1。他们发现同源基因位于小鼠4D2.2-D3和大鼠5q36.13上，这两个区域都是与人类染色体1p具有保守连锁同源性的区域。

▼ 基因功能

Cowan 等人使用酵母 2-杂交系统（2000） 证明含有 PDZ 结构域的蛋白 Pick1（PRKCABP; 605926） 结合 EphB2 的 C 末端尾部。通过共定位研究和生化分析，他们证明了含有 EphB2 和 aquaporin-1（AQP1; 107776） 的蛋白质复合物在体内形成。他们得出的结论是，Ephb2 可能通过与转移氯化物、碳酸氢盐和水的膜通道的大分子缔合来调节离子稳态和内淋巴液的产生。

Takasu 等人通过使用 Efnb2（600527） 处理胚胎大鼠皮质神经元，然后用谷氨酸进行刺激（2002） 观察到细胞内钙的大量增加取决于肝配蛋白受体 Ephb2 的细胞质结构域。 Bdnf（113505） 治疗不会导致谷氨酸刺激的细胞内钙增加。 Western blot 分析显示，Efnb2 处理增加了 Src 家族酪氨酸激酶 Fyn（137025） 对 NMDA 受体 2B（Nr2b 或 Grin2b；138252）位置 1252、1336 和 1472 的酪氨酸磷酸化。 Efnb2 处理还增加了 Creb（123810） Ser133 的磷酸化，这是由 NMDA 受体介导的。此外，Efnb2 处理增强了 Bdnf 和 Cpg15 的谷氨酸激活。高须等人（2002） 得出结论，EFNB-EPHB-NMDA 受体相互作用可能代表突触形成或成熟启动的早期步骤，并可能增强 NMDA 受体对来自细胞外环境的活性依赖性信号作出反应的能力。从一个角度来看，Ghosh（2002） 指出 Grunwald 等人（2001）和亨德森等人（2001） 报道称，缺乏 Ephb2 的小鼠突触可塑性有缺陷，尤其是 CA1 突触，这可能是由于突触处 NMDA 受体缺乏适当的聚集所致。

Murai 和 Pasquale（2002） 回顾了 Eph 受体在改变成人大脑中现有突触强度方面发挥作用的证据。

树突棘的形态变化被认为是由肌节蛋白聚合的动态调节引起的。 Irie 和 Yamaguchi（2002） 发现 EphB2 受体酪氨酸激酶与鸟嘌呤核苷酸交换因子 intersectin-1（602442） 物理结合，并与肌节蛋白调节蛋白 N-WASP（605056） 合作，进而激活 Rho 家族 GTPase Cdc42（116952） 和脊柱形态发生。

EPHB 受体酪氨酸激酶参与树突棘的形成和重塑，树突棘接收大脑中的大部分兴奋性突触输入。 Tolias 等人使用免疫沉淀、蛋白质印迹和免疫细胞化学分析（2007） 表明 TIAM1（600687） 的 PH 结构域、卷曲螺旋结构域和相邻区域与 EPHB2 相互作用。这种相互作用导致 TIAM1 磷酸化并募集至含有 NMDA 谷氨酸受体的 EPHB 复合物。突变和RNA干扰分析表明，TIAM1功能的破坏阻止了EPHB2诱导的脊柱形成。托利亚斯等人（2007） 提出 EPHB 受体部分通过招募和激活 TIAM1 来调节脊柱发育，这会导致脊柱形成所需的 RAC1（602048） 依赖性肌节蛋白重塑。

巴特勒等人（2002） 表明，β-连环蛋白（CTNNB1; 116806） 和 TCF（参见 TCF7L2; 602228）反向控制 EphB2/EphB3（601839） 受体及其配体肝配蛋白 B1（EFNB1; 300035） 在结直肠癌和沿着隐窝-绒毛轴。 EphB2 和 EphB3 基因的破坏表明，它们的基因产物限制细胞混合并在肠上皮内分配细胞群。在 EphB2/EphB3 缺失小鼠中，增殖和分化群体混合在一起。在成年 EphB3 -/- 小鼠中，潘氏细胞并不沿着向下的迁移路径，而是沿着隐窝和绒毛分散。作者得出的结论是，在肠上皮中，β-连环蛋白和 TCF 通过 EphB/ephrin B 系统将增殖和分化与细胞群的分类结合起来。

希马宁等人（2004） 发现 ephrin-A5（601535） 与 EphB2 受体结合，导致受体聚集、自身磷酸化和下游信号传导的启动。 Ephrin-A5 在模型系统中诱导 EphB2 介导的生长锥塌陷和神经突回缩。 X 射线晶体学证实了这种相互作用，并表明肝配蛋白-A5-EphB2 复合物是异二聚体。希马宁等人（2004） 强调了 A 亚类和 B 亚类 Eph 受体与肝配蛋白之间串扰的意外发现。

Holmberg 等人在小鼠身上进行了功能获得和丧失的实验（2006） 发现 EphB 受体除了指导细胞迁​​移外，还调节肠道内的增殖。 EphB2 和 EphB3 激酶依赖性信号传导促进肠道祖细胞的细胞周期重入，并约占成年小鼠小肠和结肠有丝分裂活性的 50%。霍姆伯格等人（2006） 得出结论，EphB 受体是肠道干细胞微环境迁移和增殖的关键协调者。

EPHB2 和 EPHB3 基因是结直肠癌（CRC；114500） 和正常肠细胞中 β-连环蛋白和 TCF4（602272） 的靶标。在肠上皮中，肝配蛋白 B 信号传导控制细胞类型沿隐窝绒毛轴的定位。在 CRC 中，ephrin-B 活性可抑制肿瘤在最早阶段之后的进展。科尔蒂纳等人（2007） 表明 EphB 受体通过依赖于 E-caderin（CDH1; 192090） 介导的粘附的机制来划分 CRC 细胞的扩张。他们证明，EphB 介导的区室化限制了表达 EphB 的肿瘤细胞在体外和体内扩散到 ephrin-B1 阳性区域。在肿瘤发生开始时，CRC 细胞必须沉默 EphB 表达，以避免正常表达 ephrin-B1 的肠道细胞施加排斥性相互作用（300035）。

乔根森等人（2009）实施了蛋白质组学策略来系统地确定 EphB2 和 ephrin-B1 控制的细胞分选背后的细胞特异性信号网络。对用不同同位素标记的表达 EphB2 和 ephrin-B1 的混合细胞群进行定量质谱分析揭示了细胞特异性酪氨酸磷酸化事件。通过小干扰 RNA 筛选建立了这些磷酸酪氨酸信号网络和细胞分选之间的功能关联。数据驱动的网络模型显示，混合表达 EphB2 和 ephrin-B1 的细胞之间的信号传导是不对称的，并且不同的细胞类型使用不同的酪氨酸激酶和靶标来处理由细胞与细胞接触诱导的信号。乔根森等人（2009） 提供了两种不同细胞类型之间接触发起的信号传导的系统和细胞特异性网络模型。

西塞等人（2011） 表明淀粉样蛋白-β（参见 104760）寡聚体与 EphB2 的纤连蛋白重复结构域结合并触发蛋白酶体中的 EphB2 降解。为了确定 EphB2 缺失在阿尔茨海默病和相关模型中的致病重要性，他们使用慢病毒构建体来减少或增加小鼠大脑记忆中心中 EphB2 的神经元表达。在非转基因小鼠中，短发夹 RNA 介导的 EphB2 敲低会减少 NMDA 受体电流并损害齿状回中对记忆形成很重要的长时程增强。人淀粉样前体蛋白转基因小鼠齿状回中 EphB2 表达的增加逆转了 NMDA 受体依赖性长期增强和记忆障碍的缺陷。因此，西塞等人（2011） 得出的结论是，EphB2 的消耗对于淀粉样蛋白 β 诱导的神经元功能障碍至关重要，并表明增加 EphB2 水平或功能可能对阿尔茨海默病有益。

马戈利斯等人（2010） 表明小鼠 Rhoa（165390） 鸟嘌呤核苷酸交换因子 ephexin-5（E5 或 ARHGEF15；608504）与 Ephb2 特异性共免疫沉淀。敲低和过表达研究表明，E5 与 Ephb2 的结合抑制兴奋性突触的形成。 E5-Ephb2 相互作用通过肝配蛋白 B 与 Ephb2 的结合而终止。肝配蛋白 B 激活 Ephb2 导致酪氨酸磷酸化、释放和 E5 不稳定，从而形成额外的兴奋性突触。

阿特伍德等人（2011） 在小鼠中证明，丝氨酸蛋白酶神经蛋白酶（605644） 通过调节 EphB2-NMDA 受体相互作用的动态、Fkbp5（602623） 的表达和焦虑样行为，对于杏仁核中与压力相关的可塑性至关重要。压力导致杏仁核中 EphB2 发生神经蛋白酶依赖性裂解，导致 EphB2 从 NMDA 受体 NR1（138249） 亚基解离，并促进 EphB2 受体的膜周转。动态 EphB2-NR1 相互作用增强 NMDA 受体电流，诱导 Fkpb5 基因表达，并增强焦虑的行为特征。在压力下，神经蛋白酶缺陷的小鼠没有表现出 EphB2 裂解及其与 NR1 的解离，从而导致 EphB2-NR1 静态相互作用、Fkbp5 基因的诱导减弱和低焦虑。通过向缺乏神经蛋白酶的小鼠杏仁核内注射神经蛋白酶可以恢复对压力的行为反应，并通过注射抗EphB2抗体或沉默野生型小鼠杏仁核中的Fkbp5基因来破坏对压力的行为反应。阿特伍德等人（2011） 得出的结论是，他们的发现建立了一条新的神经元通路，将压力诱导的杏仁核中 EphB2 蛋白水解与焦虑联系起来。

▼ 生化特征

晶体结构

维本加-格鲁特等人（2001） 以 1.9 埃的分辨率报道了 EphB2 的自抑制、非磷酸化形式的 X 射线晶体结构，该结构由近膜区域和激酶结构域组成。该结构得到诱变数据的支持，表明近膜片段采用螺旋构象，该构象扭曲激酶结构域的小叶并阻止激活片段获得激活构象。维本加-格鲁特等人（2001）指出，保守的近膜酪氨酸的磷酸化将通过扰乱近膜片段与激酶结构域的关联来缓解这种自抑制，同时释放磷酸酪氨酸位点以结合靶蛋白的SH2结构域。

EPHB 受体与跨膜 B-肝配蛋白结合并被跨膜 B-肝配蛋白激活，从而形成离散的双向信号传导中心，其中 EPH 受体酪氨酸激酶结构域将正向信号转导到其细胞中，而肝配蛋白将反向信号转导到其细胞中。希马宁等人（2001） 报道了 EPHB2 的 N 末端配体结合球状结构域以 2.7 埃的分辨率与 EFNB2 的完整胞外结构域结合的晶体结构。复合物中每个分子的整体结构与未结合分子中看到的相似。结合通过扩展的二聚化界面发生，该界面由延伸的肝配蛋白环插入受体表面的通道主导。然后 EPHB-EFNB 二聚体连接形成稳定的四聚体，其中每个分子与 2 个互补分子相互作用，从而实现反自磷酸化和信号启动。

▼ 分子遗传学

血小板型出血性疾病 22

Berrou 等人发现，2 名近亲兄弟姐妹患有血小板型出血性疾病 22（BDPLT22；618462）（2018） 鉴定了 EPHB2 基因中的纯合错义突变（R745C; 600997.0005）。该突变是通过全外显子组测序发现并经桑格测序证实的，与家族中的疾病分离。对患者血小板的功能分析显示，血小板对 ADP 和凝血酶的聚集反应严重受损，血栓形成减少，颗粒分泌部分受损。血小板整合素 IIb（607759）/IIIa（173470） 受体未激活。对瑞斯托菌素的反应正常，血小板的α和致密颗粒水平正常。在稳定表达人糖蛋白 VI（GPVI; 605546） 的大鼠嗜碱性白血病细胞中过度表达野生型和 R745C EPHB2 变体证实 EPHB2 R745C 突变损害了 EPHB2 自磷酸化。然而，它对肝配蛋白配体诱导的 EPHB2 聚类没有影响，表明它不会干扰 EPHB2-肝配蛋白介导的细胞间接触。总体而言，研究结果表明 EPHB2 变体损害了 GP VI 受体的激活和 IIb/IIIa 受体的下游信号传导。

体细胞突变

胡斯科等人（2004） 将依米丁对无义介导的衰变（NMD） 的抑制和微阵列分析与比较基因组杂交（CGH） 结合起来，筛选前列腺癌衍生细胞系中经历 NMD 并从两个等位基因均缺失的基因转录的转录本。通过这种方式，他们可以识别通过无义突变导致 1 等位基因失活以及通过删除导致外部等位基因丢失的基因。他们发现了 EPHB2 基因中以前未知的突变。源自脑转移的 DU 145 前列腺癌细胞系被发现携带 EPHB2（600997.0001） 截短突变和剩余等位基因的缺失。临床前列腺癌样本中还存在其他移码、剪接位点、错义和无义突变。用野生型 EPHB2 转染缺乏功能性 EPHB2 的 DU 145 细胞可抑制克隆生长。这些研究表明EPHB2可能在细胞迁移和正常组织结构的维持中发挥重要作用，并且EPHB2基因的突变失活可能在前列腺癌的进展和转移中很重要。 Mercola 和 Welsh（2004） 回顾了用于识别疾病基因关联的方法组合、吐根抑制 NMD 和 CGH 微阵列分析。多达三分之一的遗传性疾病是由破坏阅读框的突变引起的。

基特尔斯等人（2006） 对非裔美国人遗传性前列腺癌研究的 72 名先证者的 EPHB2 编码区进行了直接测序。他们在 15.3% 的非洲裔美国先证者中发现了 K1019X（3055A-T；600997.0004）突变，但在 231 个欧洲裔美国人对照样本中，这一比例仅为 1.7%。 T 等位基因在非裔美国先证者（15.3%） 中显着高于非裔美国男性对照（5.2%）（比值比 = 3.31）。为了排除由于混合分层而导致 K1019X 与非裔美国人前列腺癌之间的虚假关联，Kittles 等人（2006） 通过使用 34 个祖先信息标记（AIM） 估计每个受试者的个体祖先来控制前列腺癌病例和对照之间的祖先差异。个体西非血统的比例从 10% 到 93.5% 不等，平均估计为 71.3%。对照组的西非血统估计范围为 6.5% 至 95.3%。在对个体血统进行测试后，EPHB2 K10X 先证者与非裔美国人健康对照者的相关性仍然显着（p = 0.01）。

约翰逊等人（2010） 鉴定了人类室管膜瘤（137800） 的亚组，然后进行基因组分析，发现了亚组特异性的改变，包括先前与室管膜瘤无关的基因的扩增和纯合缺失。然后，他们使用跨物种基因组学来选择最有可能产生室管膜瘤亚组的细胞区室，并比较从不同区域分离的人类肿瘤和小鼠神经干细胞，特别是与完整或缺失的 Cdkn2a（600160）/Cdkn2b（600431）轨迹。具有扩增的 EPHB2 和删除的 CDKN2A/CDKN2B 的人幕上室管膜瘤的转录组仅与胚胎脑 Cdkn2a/Cdkn2b -/- 小鼠神经元干细胞的转录组相匹配。 Cdkn2a/Cdkn2b -/- 小鼠神经元干细胞（而非其他神经干细胞）中 Ephb2 信号的激活产生了第一个室管膜瘤小鼠模型，该模型具有高度渗透性，并准确地模拟了人类幕上肿瘤 1 个亚组的组织学和转录组（小组D）。对匹配的小鼠和人类肿瘤的比较分析揭示了控制突触发生的基因的表达和拷贝数的选择性失调，明确指出该途径的破坏是该室管膜瘤亚群产生的关键事件。

▼ 动物模型

哈尔福德等人（2000） 培育了 Ryk 缺陷小鼠（600524），发现它们具有独特的颅面外观、四肢缩短，以及由于与二级腭裂相关的喂养和呼吸系统并发症而导致出生后死亡率。与 Ephb2/Ephb3 缺陷小鼠的腭裂表型以及果蝇 Ryk 直系同源物“Derailed”的作用一致。在排斥性轴突寻路线索的转导中，生化数据表明 Ryk 参与了 Eph 受体和细胞连接相关 Af6 介导的信号传导（159559）。哈尔福德等人（2000） 得出的结论是，他们的发现强调了不同 RTK 亚族成员之间信号串扰的重要性。

亨克梅尔等人（1996） 产生了 2 个不同的缺乏 Ephb2 的小鼠品系，他们将其称为 Nuk1：一个无效等位基因和一个编码缺乏酪氨酸激酶和 C 末端结构域的 β-gal 融合受体的等位基因。通过分析纯合突变小鼠的大脑，他们证明形成前连合后束的大多数轴突异常迁移到大脑底部，导致皮质神经元无法连接两个颞叶。亨克梅尔等人（1996） 得出结论，Ephb2 是一种结合跨膜配体的受体，在哺乳动物中枢神经系统中特定轴突的寻路中发挥着关键而独特的作用。

考恩等人（2000） 在 Henkemeyer 等人产生的 Ephb2 敲除突变小鼠中检测到与异常前庭功能相关的品系特异性循环行为（1996）。在突变胚胎中，对侧内耳传出生长锥在中线表现出不适当的通路选择，而在突变成人中，半规管内淋巴填充的管腔严重减少。 EphB2在内耳上皮中产生内淋巴的暗细胞中表达，这些细胞在突变体中表现出超微结构缺陷。通过证明结合 EphB2 和 B-ephrins C 末端的包含 PDZ 结构域的蛋白质也可以识别阴离子交换剂和水通道蛋白的细胞质尾部，提供了与液体调节的分子联系。考恩等人（2000）表明EphB2可以通过与转移氯离子、碳酸氢盐和水的膜通道的大分子缔合来调节离子稳态和内淋巴液的产生。

α罗等人（2008） 观察到 Ephb2 和/或 Ephb3 缺陷小鼠的双阴性（DN；CD4（186940） 阴性/CD8（见 186910） 阴性）和双阳性细胞的胸腺细胞结构显着减少。成年突变胸腺的 DN 细胞比例增加，而其他亚群的百分比没有显着变化。从 DN3（CD44（107269）-阴性/CD25（147730）-阳性）阶段开始，所有区室中的胸腺细胞数量均显着减少，而 DN1（CD44-阳性/CD25-阴性）或 DN2（CD44-阳性/CD25 阳性）细胞。α罗等人（2008） 在第 15 天的 Ephb2 和/或 Ephb3 缺陷胸腺中观察到相同的变化，并提出成人表型是个体发育早期出现的缺陷逐渐积累的结果。

瓦亚普里等人（2015） 在小鼠血小板中发现了 Ephb2 基因的表达，并证明 Ephb2 在涉及接触依赖性和接触非依赖性信号传导的血小板活化中具有复杂的作用。对携带 Ephb2 缺乏细胞内区域（LacZ 突变体）的小鼠进行的血小板功能研究表明，细胞内区域的中断会消除血小板活化、颗粒分泌、钙动员、纤维蛋白原结合和血栓形成。这些功能缺陷与 PI3K 和血小板整合素 ITGA2B/ITGB3 的由内而外信号传导减少有关。突变血小板中的缺陷扩散和凝块收缩表明，当纤维蛋白原与 ITGA2B/ITGB3 结合时，Ephb2 也可能参与由外向内的信号传导。即使 Ephb2 在血小板表面的配体结合不受影响，也会发生这些变化。突变小鼠表现出出血增加。

▼ 等位基因变异体（5 个精选示例）：

.0001 前列腺癌、体细胞进展和转移
EPHB2、GLN723TER

Huusko 等人在源自脑转移的前列腺癌（603688） 细胞系 DU 145 中（2004） 使用无义介导的 RNA 衰变微阵列和基于阵列的比较基因组杂交的组合来鉴定 EPHB2 基因的双等位基因失活，其中涉及野生型等位基因的丢失和另一个中的无义 gln723-to-ter（Q723X） 突变等位基因。 Q723X 替代源于 2167C-T 过渡。

.0002 前列腺癌、体细胞进展和转移
EPHB2、ALA279SER

Huusko 等人在转移性前列腺癌（603688） 样本中（2004） 发现了 ala279-to-ser（A279S） 杂合突变，该突变是由 EPHB2 基因中的 835G-T 颠换引起的。另一个等位基因丢失了。

.0003 前列腺癌、体细胞进展和转移
EPHB2、ASP679ASN

Huusko 等人在 2 种原发性前列腺癌（603688） 中（2004） 发现了由 EPHB2 基因中的 2035G-A 转变引起的 asp679 到 asn（D679N） 突变。野生型等位基因没有丢失。在 246 名正常对照者中均未发现该突变。

.0004 非裔美国人易感前列腺癌，体细胞
EPHB2、LYS1019TER

基特尔斯等人（2006） 证明了 EPHB2 基因中的无义突变 lys1019 to stop（K1019X） 与非裔美国人的前列腺癌（603688） 之间的关联。 K1019X 替换源自外显子 15 中的 3055A-T 颠换。

.0005 血小板型出血性疾病，22（1 个家族）
EPHB2、ARG745CYS

Berrou 等人发现，2 名近亲兄弟姐妹患有血小板型出血性疾病 22（BDPLT22；618462）（2018） 在 EPHB2 基因中鉴定出纯合 c.2233C-T 转换（c.2233C-T，NM_004442.6），导致胞质内酪氨酸激酶结构域中的保守残基处的 arg745 至 cys（R745C） 取代。该突变是通过全外显子组测序发现并经桑格测序证实的，与家族中的疾病分离。它在 ExAC 数据库中的发现频率非常低（小于 10（-6））。