锌指蛋白 224； ZNF224

KOX22

此条目中代表的其他实体：

包含锌指蛋白 255；ZNF255，包含
骨髓锌指蛋白 2；BMZF2，包括

HGNC 批准的基因符号：ZNF224

细胞遗传学位置：19q13.31 基因组坐标（GRCh38）：19:44,094,361-44,109,826（来自 NCBI）

▼ 描述

锌指蛋白（ZNF）是 DNA 结合转录调节因子，含有 Kruppel 相关框（KRAB）结构域的 ZNF 通常介导转录抑制。ZNF224 基因编码 2 个剪接变体，ZNF224 和 ZNF255（也称为 BMZF2），它们在成人和胎儿组织中差异表达，并编码具有不同亚细胞定位的蛋白质。ZNF224 包含一个 KRAB 结构域，定位于细胞核，并作为醛缩酶 A（ALDOA；103850）基因的转录抑制因子发挥作用。ZNF255 缺乏 KRAB 结构域，定位于整个细胞，包括细胞核、细胞质和核仁。ZNF224 和 ZNF255 均与 WT1（607103）的特定亚型在物理和功能上相互作用（Medugno 等人，2007；Florio 等人，2010）。

▼ 克隆和表达

利用基于Kruppel样基因保守序列的PCR引物筛选骨髓cDNA文库，然后进行数据库搜索和3-prime和5-prime RACE，Han等人（1999）分离出编码几种锌指蛋白的 cDNA，包括 ZNF255。推导的 623 个氨基酸的 ZNF255 蛋白包含 18 个串联重复的 C 端锌指基序，散布着保守的指节序列，以及一个 N 端 Kruppel 相关新颖框（KRNB），这也存在于 FDZF2（ZNF230）中。RT-PCR 分析检测到广泛表达，在造血组织和细胞系中表达最高。

Lee等人通过亲和层析分离与WT1相互作用的HeLa细胞核蛋白，然后对HeLa细胞mRNA进行肽分析和RT-PCR（2002）获得了编码ZNF255的cDNA，他们将其称为BMZF2。推导的 622 个氨基酸蛋白质的计算分子量为 72 kD。Northern印迹分析仅在胎儿组织中检测到表达。在胎儿脑、肺、肝脏和肾脏中检测到约5.0和4.0的转录物，并且在胎儿肺中也检测到约3.4kb的转录物。对从转染细胞获得的胞质和核级分进行蛋白质印迹分析表明 ZNF255 在细胞核中表达。

梅杜尼奥等人（2003）将 ZNF224 鉴定为一种 97 kD 的蛋白质，可与 ALDOA（103850）负调控元件（NRE）相互作用。通过数据库分析，他们鉴定出了 ZNF224 cDNA。推导的 707 个氨基酸蛋白质包含 19 个串联重复的 C2H2 型锌指基序，由 7 个氨基酸接头分隔。

梅杜尼奥等人（2007）确定 ZNF224 和 ZNF255 是同一基因的剪接变体，其 5 引物 UTR 和 5 引物编码区不同。较长的 ZNF224 蛋白包含一个 N 端 KRAB 结构域和 19 个 C 端锌指。ZNF255 缺少 ZNF224 的 KRAB 结构域，但具有 19 个锌指。半定量 PCR 检测到所有成人和胎儿组织中都有可变的 ZNF224 表达。ZNF255 的表达在成人组织中受到更多限制，并且与胎儿组织相比，在成人组织中的表达通常较低。免疫荧光分析显示ZNF224仅在细胞核中表达。相比之下，ZNF255 在细胞核和细胞质中均表达，并且在 20% 至 30% 的细胞中也分布在核仁中，并与原纤维蛋白共定位（FBL; 134795）。

弗洛里奥等人（2010）指出小鼠不包含 ZNF224 基因的直系同源物。

▼ 基因功能

Han 等人（1999）表明ZNF255的KRNB框在酵母细胞中具有轻微但显着的反式激活活性，但在哺乳动物细胞中没有。

李等人（2002）证明ZNF255在体外和体内与WT1相互作用。突变分析表明，ZNF255 的锌指 6 至 10 需要与 WT1 的锌指区域相互作用。ZNF255 抑制 WT1 的转录激活，并且在报告基因测定中证实了 ZNF255 内阻遏结构域的存在。

通过凝胶位移测定，Medugno 等人（2003）证实ZNF224结合ALDOA基因中的负顺式元件NRE。ZNF224 C 端锌指的渐进缺失减少了 ALDOA NRE 结合。ZNF224 在 COS 细胞中的表达以剂量依赖性方式抑制含有 2 个 ALDOA NRE 核心元件的启动子的报告基因活性。梅杜尼奥等人（2003）得出结论，ZNF224 在细胞周期和分化过程中负向调节 ALDOA 基因表达。

Medugno 等人使用染色质免疫沉淀和报告基因检测转染的 HEK293 细胞（2007）表明ZNF255在结合ALDOA启动子区域的NRE和抑制ALDOA报道质粒的表达方面比ZNF224弱。

通过人类细胞系的共免疫沉淀分析，Florio 等人（2010）发现ZNF224与WT1的-KTS亚型特异性且排他地相互作用，而ZNF255与WT1的+KTS和-KTS亚型相互作用。使用含有 WT1 靶基因 VDR（601769）启动子区域的报告质粒，Florio 等人（2010）表明ZNF224的共转染引起WT1（-KTS）介导的VDR表达的剂量依赖性增强，而ZNF255则没有效果。染色质免疫沉淀分析表明，ZNF224 与 WT1 一起被募集至 VDR 启动子。ZNF224 的敲除减少了 VDR mRNA 和蛋白质。相比之下，ZNF255（而非 ZNF224）与 WT1（+KTS）共定位于 HEK293 细胞的多核糖体部分，并与聚（A）核糖核颗粒共纯化。

▼ 基因结构

Medugno 等人（2007）确定ZNF224基因含有6个外显子。前 3 个外显子是非编码的。ZNF255转录物的5-prime UTR对应于内含子5，ZNF255的编码区完全包含在外显子6内。

▼ 测绘

通过体细胞杂交分析和原位杂交，Rousseau-Merck 等人（1993）证明 KOX22（ZNF224）基因和 KOX5（ZNF45; 194554）基因对应到 19q13.2-qter。此外，通过脉冲场凝胶电泳实验，他们表明这对基因位于长度小于 300 kb 的 DNA 片段内。

使用 FISH，Han 等人（1999）将 ZNF224 基因对应到染色体 19q13，ZNF256 基因（606956）也对应到该染色体。