AFADIN; AFDN

骨髓/淋巴细胞或混合谱系白血病，转位至 4；MLLT4
混合谱系白血病，转移至 4
来自 6 号染色体的 ALL1 融合基因；AF6
独木舟，果蝇，同源物

此条目中代表的其他实体：

AF6/MLL FUSION GENE，包括

HGNC 批准的基因符号：AFDN

细胞遗传学位置：6q27 基因组坐标（GRCh38）：6:167,826,563-167,972,022（来自 NCBI）

▼ 说明

AF6 是 Ras（参见 HRAS；190020）靶标，可调节 Ras 激活下游的细胞间粘附。在由 t（6;11）易位引起的白血病中，它与 MLL（159555）融合（Taya et al., 1998）。

▼ 克隆与表达

大多数婴儿期急性白血病以及至少 5% 的大龄儿童和成人急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病显示染色体带 11q23 异常。在这些情况下，易位导致 11q23 处的基因（分别称为 ALL1、MLL 和果蝇“trithorax”（159555）的人类同源物）与 4 号染色体（159557）、9 号染色体（159558）或 19 号染色体（159556）上的部分基因融合。普拉萨德等人（1993）描述了涉及第四种常见易位（涉及 11q23，t（6;11）（q27;q23））的“伙伴基因”的克隆和表征。该基因被他们命名为 AF6，被发现在多种细胞类型中表达，并编码 1,612 个氨基酸的蛋白质。该蛋白质含有富含脯氨酸、带电氨基酸、丝氨酸或谷氨酰胺的短链。此外，

斋藤等人（1998）鉴定了 AF6 的 2 个剪接变体，与 Prasad 等人报道的 AF6 cDNA 相比，它们在外显子 28 中使用替代的 3-prime 剪接位点，并包含额外的下游外显子（1993）。推导的蛋白质含有 1,817 和 1,744 个氨基酸，并具有不同的 C 末端。斋藤等人（1998）指出 AF6 蛋白有 2 个不同的特征：Dlg（参见 601014）同源重复（DHR）/GLGF 结构域和 Ras 相互作用结构域。

通过蛋白质印迹分析，Boettner 等人（2000）在人肺、肾、睾丸、卵巢、胰腺中检测到约 195 和 180 kD 的 AF6 蛋白，但在脾和心脏中未检测到。在犬肾细胞和 MCF7 人乳腺癌细胞的汇合培养物中，AF6 定位于细胞-细胞连接区域。AF6 与 ZO1（TJP1；601009）共定位于 MCF7 细胞的顶端表面，但不与基底表面的 β-连环蛋白（参见 116806）共定位。MCF7 细胞表现出增强的 AF6 强度和膜定位，因为它们与邻近细胞建立了完全粘附潜力。在完全汇合的细胞层中，细胞质中的 AF6 染色增强。

▼ 基因功能

Kuriyama 等人使用体外翻译的 cDNA 进行蛋白质下拉测定（1996）发现牛 Af6 的 N 末端结构域与与不可水解的 GTP 类似物结合的 Hras 相互作用，与 GDP-Hras、Rras（165090）、Rala（179550）和 Rhoa（ARHA; 165390）的相互作用要弱得多。突变分析表明GTP-Ras相互作用结构域位于牛Af6的氨基酸36和206之间。

塔亚等人（1998）表明 Af6 与牛脑细胞质中的去泛素化酶 Fam（USP9X; 300072）相互作用。在犬肾细胞中，Af6 与 Fam 的相互作用比例约为 1:10。Fam 在犬肾细胞的细胞-细胞接触位点积累，并部分与 Af6 共定位。Af6 在完整细胞中被泛素化，Fam 阻止 Af6 泛素化。

通过突变分析，Boettner 等人（2000）确定人 AF6 中 2 个 N 端 Ras 相互作用结构域中的第一个结合 HRAS、KRAS（KRAS2; 190070）和 NRAS（164790）；第二个 Ras 结合域不结合这些 Ras 蛋白。RAP1A（179520）也与该基序相关。HRAS 和 RAP1A 在体内共转染的 COS 细胞中与全长 AF6 相互作用，并且一部分 RAP1A 与 AF6 共定位于质膜上。Boettner 等人使用 Jurkat 人类 T 细胞的酵母 2 杂交筛选（2000）发现 AF6 的残基 912 至 1,612 与 profilin-1（PFN1; 176610）和 -2（PFN2; 176590）相互作用；AF6 和 profilin-1 之间的相互作用更加明显。通过对来自 AF6 转染的 COS 细胞的 profilin-1 进行免疫共沉淀，证实了这两种蛋白之间的直接相互作用。由于 Profilin 参与皮质肌节蛋白组装，Boettner 等人（2000）假设 AF6 可能通过 Profilin 调节肌节蛋白建模。

贝盖-穆勒等人（2002）发现大鼠 Af6 与人 LMO2（180385）的氨基酸 27 至 158 相互作用，LMO2 是一种在骨髓和红系前体细胞中表达的基因。他们认为，嵌合MLL/AF6蛋白可能通过该蛋白的AF6部分与造血基因调节复合物上的LMO蛋白相互作用而引起白血病。

张等人（2005）发现 Jurkat 细胞中通过 RNA 干扰敲除 AF6 增强了 RAP1 诱导的整合素（参见 ITGB1；135630）介导的细胞粘附。AF6 的过表达抑制 RAP1 诱导的细胞粘附，但 AF6 不抑制 Mn（2+）诱导的细胞粘附，其中整合素直接被二价阳离子激活。全长 AF6 在抑制细胞粘附方面比 AF6 的分离 Ras 关联结构域更有效。AF6 的表达增加了内源性 RAP1-GTP 水平，并且似乎使 RAP1 稳定在 GTP 结合状态。张等人（2005）得出结论，AF6 通过将 RAP1-GTP 隔离在非生产性复合物中来抑制 RAP1 介导的细胞粘附，从而阻止 RAP1 与介导粘附的效应器以及 RAP GTP 酶激活蛋白的相互作用。

▼ 基因结构

斋藤等人（1998）确定 MLLT4 基因包含 32 个外显子，跨度约为 140 kb。

▼ 测绘

通过 FISH，Saha 等人（1995）将 AF6 基因定位到染色体 6q27，位于与卵巢恶性肿瘤相关的严重缺失区域的远端（167000）。因此，AF6 与该区域不同并且位于该区域的端粒中。

▼ 细胞遗传学

普拉萨德等人（1993）在与白血病相关的常见易位 t（6;11）（q27;q23）中鉴定出 AF6 是 MLL 的伴侣。Saha 等人使用 RACE-PCR（1995）确认了 AF6 中的断点。

t（6;11）（q27;q23）易位产生嵌合 MLL/AF6 蛋白，计算分子量为 325 kD。在嵌合蛋白中，MLL 的 N 端部分（包括 3 个 AT 钩基序）与除前 35 个氨基酸外的所有 AF6 融合，使 AF6 的 Ras 相互作用结构域和 DHR 基序保持完整。通过对转染的 COS 细胞和具有 t（6;11）（q27;q23）易位的人类细胞系进行蛋白质印迹分析，Joh 等人（1997）发现MLL/AF6融合蛋白的表观分子质量为360 kD。免疫定位和细胞分级分离以及蛋白质印迹分析表明 MLL/AF6 靶向细胞核，而 AF6 本身是细胞质。突变分析表明MLL中含有AT钩基序的区域负责嵌合蛋白的核定位。

▼ 分子遗传学

斋藤等人（1998）鉴定了 AF6 中的插入/缺失多态性，该多态性决定了 21 bp 外显子的存在或不存在，他们将其命名为外显子 14a。外显子 14a 的插入导致蛋白质在 Ras 相互作用结构域和 DHR 基序之间多了 7 个氨基酸。斋藤等人（1998）估计插入频率为 0.35。