CCR4-非转录复合物，亚基 6 样； CNOT6L

CNOT6-LIKE
CCR4，酿酒酵母，B 的同源物；CCR4B

HGNC 批准的基因符号：CNOT6L

细胞遗传学位置：4q21.1 基因组坐标（GRCh38）：4:77,713,386-77,820,268（来自 NCBI）

▼ 描述

CNOT6L 是 CCR4-NOT 复合体的一个亚基，具有细胞质去腺苷酸酶的功能，具有 3-prime-to-5-prime 核糖核酸外切酶活性（Morita et al., 2007）。

▼ 克隆和表达

通过在数据库中搜索酵母 Ccr4 的直系同源物，Morita 等人（2007）鉴定了人类 CNOT6L，他们将其称为 CCR4B。推导的 555 个氨基酸蛋白具有 N 端富含亮氨酸重复（LRR）结构域和 C 端核酸酶结构域。人 CNOT6L 与人 CCR4A（CNOT6; 608951）以及小鼠、果蝇和酵母中的直系同源物具有显着的同源性。Northern印迹分析检测到2个CNOT6L转录本在人体组织中广泛表达，其中在胎盘、骨骼肌、胰腺和睾丸中表达水平最高。CNOT6L 蛋白定位于转染的 NIH-3T3 细胞的细胞质。

▼ 基因功能

Morita 等人使用质谱法和免疫共沉淀实验（2007）证明 CNOT6L 与酵母 CCR4-NOT 复合物的人类直系同源物相互作用。在以单链 Poly（A） RNA 作为底物的体外去腺苷酸酶测定中，人 CNOT6L 显示出 3-prime-to-5-prime Poly（A）外切核糖核酸酶活性。抑制 NIH-3T3 细胞中的 CNOT6L 会严重降低增殖并抑制细胞周期从 G0/G1 到 S 期的进展。免疫印迹分析表明 CNOT6L 耗尽的细胞中 G0/G1 细胞周期停滞是由 p27（KIP1）（CDKN1B; 600778）表达增加引起的。CNOT6L 耗尽的细胞中 p27（KIP1）的表达增加，这是由于 CNOT6L 的 3-prime-to-5-prime poly（A）外核糖核酸酶活性不存在去腺苷化和降解，从而增强了其 mRNA 的稳定性。

米塔尔等人（2011）发现 MCF7 乳腺癌细胞中 CCR4 去腺苷酸酶旁系同源物 CNOT6 和 CNOT6L 的敲低导致细胞增殖减少、细胞周期停滞和细胞存活率降低。他们还发现人类 CNOT6L 的 LRR 结构域影响其亚细胞定位。CNOT6L 主要定位于 HEK293 细胞的细胞质，其中一些存在于细胞核中，但 LRR 结构域的缺失导致几乎完全定位于细胞质。CNOT6L 的 LRR 结构域也是其与 CCR4-NOT 复合物的另一个亚基 CAF1A（601245）相互作用所必需的，CNOT6L 通过它与复合物中的其他亚基相互作用。HEK293 细胞中的异位表达和 MCF7 细胞中的过度表达表明，与酵母不同，CNOT6L 的 LRR 结构域的缺失影响细胞增殖，但对去腺苷酶活性或细胞活力没有影响。MCF7 细胞中的敲低实验表明 CNOT6/CNOT6L 调节不同的基因集，与复合物中的其他亚基重叠有限。CNOT6/CNOT6L 敲低后表达增强最多的基因之一是胰岛素样生长因子结合蛋白 5（IGFBP5; 146734），它通过 p53（TP53; 191170）依赖性途径介导细胞周期停滞和衰老。

波莱斯卡娅等人（2016）发现 CNOT6L 在人类肌肉细胞分化中具有抑制作用，与成肌细胞生长速率的改变无关。CNOT6L 敲低永生化人 LHCN 成肌细胞的转录组分析鉴定了 CNOT6L 的靶 mRNA，其中趋化因子 IL8（146930）是敲低细胞中上调最多的基因。分析表明，IL8 调节成肌细胞分化，并且是 CNOT6L 脱腺苷酶的直接功能靶标。CNOT6L 在分化骨骼肌成肌细胞时与 IL8 mRNA 结合，并使 mRNA 不稳定，最有可能是通过最初缩短其聚腺苷酸尾，导致 IL8 蛋白表达的调节，从而影响 LHCN 成肌细胞的分化。

▼ 生化特征

王等人（2010）确定了人 CNOT6L 催化核酸酶结构域的晶体结构，涵盖氨基酸 169 至 539，分辨率为 1.94 埃。整体结构由 11 个 α 螺旋和 17 个 β 链组成，具有 2 层 α-β 夹心结构，具有大约 2 倍内部对称性。2 个大部分反平行的 β 折叠位于内部，外侧有 2 个 α 螺旋层，是具有高度保守的活性核心残基的典型水解酶，类似于 APE1（107748）。CNOT6L 催化结构域的活性位点包含 2 个结合的 Mg（2+）离子和 5 个必需氨基酸（asn195、glu240、asp410、asp489 和 his529），在 2 个 Mg（2+）周围形成带负电荷的口袋。晶体结构与突变和生化数据相结合表明 CNOT6L 显示出完整的 Mg（2+）依赖性去腺苷酸酶活性，具有严格的底物识别和对 Poly（A） RNA 的偏好。作者提出了 CNOT6L 的去腺苷酸酶机制，涉及五共价磷酸盐转变。

张等人（2016）报道了人类 CNOT6L 核酸酶结构域与两类去腺苷酶抑制剂、天然核苷酸和氨基糖苷类代表复合物的晶体结构。结构分析证实，两类去腺苷酶抑制剂都占据了 CNOT6L 中的底物和镁结合位点，表明它们与底物和二价镁离子竞争重叠的结合位点。

▼ Mapping

Gross（2018）根据 CNOT6L 序列（GenBank AK304397）与基因组序列（GRCh38）的比对，将 CNOT6L 基因对应到染色体 4q21.1。