碳酐酶VB,线粒体
通过用对应于 CA2( 611492 ) 、CA4( 114760 ) 和 CA6( 114780 )的 cDNA 探针对胰腺和唾液腺组织的 RT-PCR 衍生的 cDNA 克隆进行阴性筛选,然后进行 5-prime 和 3-prime RACE,Fujikawa -足立等人(1999)获得了编码 CA 家族成员的 cDNA,他们称之为 CA5B。CA5B 编码一个 317 个氨基酸的蛋白质,与 CA5 有 64% 的序列相似性( 114761),线粒体 CA,并包含 33 个氨基酸残基信号序列。蛋白质印迹分析显示 36-kD 蛋白质前体和 32-kD 成熟蛋白质。内切糖苷酶处理不影响蛋白质的大小。用细胞分级和共聚焦荧光显微镜进行的蛋白质印迹分析显示线粒体中的特定定位。与 CA5 一样,CA5B 是一种对乙酰唑胺敏感的低活性酶。Northern印迹分析显示比CA5更广泛的组织分布,在除肝脏外的所有检查组织中表达4种不同大小的转录物(1.3、2.6、4.4和6.0 kb),在心脏、胰腺、肾脏、胎盘中表达最强、肺和骨骼肌。通过 RT-PCR 分析,CA5B 在胰腺、肾脏、唾液腺和脊髓中表达,但在肝脏中不表达,
沙阿等人(2000)通过与先前表征的鼠 CA VA( 114761 )的同源性鉴定了一种称为 VB 型的小鼠线粒体碳酸酐酶。沙阿等人(2000)发现人VB的碳酸酐酶结构域序列在小鼠和人之间显示出比小鼠和人VA的CA结构域更高的保守性(95%同一性)(78%同一性)。对这些和其他可用的人和小鼠 CA 同工酶序列之间的系统发育关系的分析表明,哺乳动物 CA VB 的进化比 CA VA 慢得多,接受氨基酸取代的速度至少慢 4.5 倍,因为每个都从其各自的人类-小鼠祖先基因进化而来。 9000万年前。组织分布的差异和对 CA VB 序列的更大进化限制表明,两种形式的线粒体碳酸酐酶进化为承担不同的生理作用。
▼ 测绘
通过 FISH,Fujikawa-Adachi 等人(1999)将 CA5B 基因定位到 Xp22.1。