聚合酶、DNA、ε-3

POLE3 是一种组蛋白折叠蛋白，可与其他组蛋白折叠蛋白相互作用，以不依赖序列的方式结合 DNA。这些组蛋白折叠蛋白二聚体结合在更大的酶复合物中，用于 DNA 转录、复制和包装。

▼ 克隆与表达

李等人（2000）在从 HeLa 细胞中纯化的 DNA 聚合酶 ε 复合物中鉴定了 POLE3，他们将其命名为 p17。通过检索EST数据库并筛选HeLa细胞cDNA文库，他们获得了编码POLE3的全长cDNA。推导出的蛋白质含有 147 个氨基酸，计算出的分子量约为 17 kD。POLE3 包含一个组蛋白折叠基序，类似于在核心组蛋白中识别为二聚结构域的扩展螺旋-链-螺旋结构。组蛋白折叠基序后面是酸性区域。POLE3 的组蛋白折叠基序和酸性延伸与 CBFA（NFYB; 189904 ）最相似。POLE3 与 S. cerevisiae 聚合酶 ε 的 DPB4 亚基具有 33% 的氨基酸同一性。

普特等人（2000）在从 HeLa 细胞核提取物中纯化的染色质重塑复合物 CHRAC 中鉴定了 POLE3，他们将其命名为 CHRAC17 或 p17。该蛋白质含有 148 个氨基酸，通过 SDS-PAGE 显示表观分子量为 17 kD。POLE3 包含一个假定的 H2B 型组蛋白折叠结构域，并与果蝇组蛋白折叠蛋白 Chrac14 具有高度同源性。Northern 印迹分析揭示了一个 2.4-kb 转录物的可变但普遍的表达，该转录物与另一种组蛋白折叠蛋白 CHRAC15（CHRAC1; 607268 ） 的表达平行。

博洛尼亚等人（2000）克隆了小鼠 Pole3，他们将其命名为 Ybl1。推导出的 145 个氨基酸的蛋白质是高度酸性的，具有一个短的 N 末端、一个中央 65 个氨基酸的组蛋白折叠基序和一个富含赖氨酸和酸性残基的短 C 末端。作者指出，存在高度的系统发育保守性，超出了组蛋白折叠基序。Northern印迹分析揭示了在所有测试的小鼠细胞系中1.2-kb转录物的表达。几种哺乳动物细胞系的核提取物的蛋白质印迹分析显示 20 kD 的条带，表明翻译后修饰。

▼ 基因功能

普特等人（2000）使用与人 ISWI 的 SNF2H（SMARCA5; 603375 ） 和 SNF2L（见300012 ） 同种型交叉反应但不区分它们的抗体从 HeLa 细胞核提取物中亲和纯化了人类染色质重塑复合物 CHRAC 。POLE3、CHRAC1 和 BAZ1A（ 605680 ），作者称之为 ACF1，在这个含有 ISWI 的复合物中共免疫沉淀，作者确定该复合物主要包含 ISWI 的 SNF2H 亚型。Poot 等人使用重组蛋白的下拉分析（2000）发现 POLE3 和 CHRAC1 直接相互作用，他们得出结论，POLE3 的 H2B 型组蛋白折叠结构域可能与 CHRAC1 的 H2A 型组蛋白折叠结构域相互作用。他们证实了 POLE3-CHRAC1 复合物的高亲和力 DNA 结合活性，解离常数在亚微摩尔范围内。POLE3 和 CHRAC1 不单独与 DNA 相互作用，并且 POLE3-CHRAC1 复合物与核小体的相互作用不好。

Bolognese 等人使用重组小鼠蛋白质和核提取物之间的体外蛋白质-蛋白质相互作用测定（2000）证实了 Pole3 和 Chrac1 之间的异二聚化。在核小体重组分析中，Pole3-Chrac1 二聚体与溶液中和 DNA 上的组蛋白形成复合物。

李等人（2000）在从 HeLa 细胞中纯化的 DNA 聚合酶 ε 复合物中鉴定了 POLE3 和 POLE4（ 607269 ），他们称之为 p12。HEK293 细胞中两种蛋白质的共转染和免疫共沉淀揭示了它们之间的直接相互作用。POLE3-POLE4 复合物，但不是单独的 POLE3 或 POLE4，可以免疫沉淀 DNA 聚合酶 ε 复合物的体外翻译的 261-kD 催化亚基（POLE1；174762）和 59-kD 辅助亚基（POLE2；602670）。

使用质谱法，Wang 等人（2008）将 POLE3 鉴定为 HeLa 细胞中含有 ADA2A（TADA2A; 602276 ） 的（ATAC） 组蛋白乙酰转移酶复合物的一个组成部分。

▼ 测绘

基于与 EST（GenBank W03622 ） 的序列相似性，Li 等人（2000）将 POLE3 基因对应到染色体 9q33。