天然杀伤细胞受体 2B4; CD244 抗原

自然杀伤（NK） 细胞表达激活和抑制细胞表面受体。抑制性信号受体都具有基于细胞质免疫受体酪氨酸的抑制基序或 ITIM，而激活受体缺乏 ITIM 并与包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序或 ITAM 的DAP12（TYROBP; 604142 ） 相关联。杀伤细胞免疫球蛋白（Ig） 样受体或 KIR（参见 KIR2DL1；604936）和其他 NK 细胞受体与主要组织相容性复合物（MHC） 分子相互作用（参见142800）。CD2（ 186990 ） 家族的成员反而相互依附。细胞表面糖蛋白 2B4 与 CD2 相关，参与调节 NK 和 T 细胞功能。Boles 等人，1999 年）。

▼ 克隆与表达

通过筛选基因组 DNA 文库并用小鼠 2b4 进行探测，然后筛选人类 NK 细胞 cDNA 文库，Boles 等人（1999）分离出编码人类 2B4 的 cDNA。序列分析预测，365 个氨基酸的蛋白质与小鼠序列有 70% 相似，与 CD2 家族的其他成员相似约 45%，具有 18 个氨基酸的前导序列；204 个氨基酸的胞外区域，具有 2 个 Ig 样基序和 8 个潜在的 N-连接糖基化位点；一个 24 个氨基酸的跨膜结构域；和一个含有 6 个酪氨酸残基的 120 个氨基酸的胞质尾部。Northern 印迹分析在 T 和 NK 细胞系中检测到 3 和 5 kb 转录本；然而，外周血白细胞、脾脏和淋巴结仅表达 3-kb 转录本。

通过免疫沉淀和蛋白质印迹分析，Nakajima 等人（1999）表明 2B4 表达为 63 kD 的蛋白质，可通过去糖基化降低至 42 kD。流式细胞仪分析将表达 2B4 的细胞范围扩展到单核细胞以及一大群 CD8（见186730）阳性细胞和一小部分 CD4 阳性细胞。

通过用小鼠 2b4 探测脾脏 cDNA 文库，Tangye 等人（1999）分离出编码 2B4 的 cDNA。

▼ 基因功能

Boles 等人的功能分析（1999）证明 2B4 与特异性抗体的结合激活了 NK 细胞溶解活性。

使用与啮齿动物 Cd4（ 186940 ）的结构域 3 和 4 融合的重组人 NK 细胞激活配体 2B4和流式细胞术分析，Brown 等人（1998）证明 CD48（ 109530 ） 与 2B4 结合。BIAcore 表面等离子共振分析表明，CD48 对 2B4 的亲和力比 CD48 和 CD2 的亲和力高约 10 倍。

中岛等人（1999）发现 2B4 与抗体或 CD48 的连接导致 NK 细胞介导的细胞溶解，但不会导致 T 细胞介导的细胞溶解。

Tangye 等人的结合分析（1999）表明磷酸化的 2B4 募集 SHP2（ 176876 ） 或 SLAM（ 603492 ） 相关蛋白（SAP 或 SH2D1A；300490 ）。

Parolini 等人通过研究 X 连锁淋巴组织增生性疾病（XLPD; 308240 ） 和 SAP 基因缺陷患者的 NK 细胞功能（2000）发现许多触发受体表现出正常功能。然而，在 2B4 与 CD48 相互作用后，NK 细胞对 EB 病毒（EBV） 感染的细胞发挥作用，这主要通过 NKp46（LY94; 604530），被抑制。2B4-CD48 和/或 NK 受体-HLA 相互作用的破坏恢复了 NK 细胞溶解活性。RT-PCR 分析在患者和正常个体中检测到全长 2B4 cDNA 以及缺乏 Ig C2 结构域的 2B4 分子。分子分析未能揭示正常和患者 2B4 序列之间的任何差异。免疫印迹分析显示，用过钒酸盐处理正常而非 XLPD NK 细胞导致 2B4 与 SAP 的关联。帕罗里尼等人（2000）提出抗 2B4 治疗可能对等待骨髓移植的 ​​XLPD 患者有用。

通过研究具有 SAP 缺失的 XLPD 患者，Tangye 等人（2000）发现虽然 XLPD 患者的 NK 细胞可以激活，但 SAP 的缺乏选择性地削弱了 2B4 介导的激活途径。

在 2 名健康男性中，与 2 名患有 XLPD 的已故亲属携带相同的 SAP 突变，Benoit 等人（2000）发现 NK 细胞活性不能通过 2B4 连接增强。作者认为，这种预计会破坏 SLAM 结合的 SAP 突变可能会干扰 2B4 结合，因为它与 SLAM 具有很强的同源性。

Aoukaty 和 Tan（2005）发现来自 XLP 个体的 NK 细胞在刺激 2B4 后未能磷酸化 GSK3A（ 606784 ） 和 GSK3B（ 605004 ）。缺乏 GSK3 磷酸化使 GSK3 失活并阻止转录共激活因子 β-连环蛋白（CTNNB1; 116806 ） 在细胞质中的积累及其随后易位至细胞核。Aoukaty 和 Tan（2005）确定了 VAV1（ 164875 ）、RAC1（ 602048 ）、RAF1（ 164760 ）、MEK2（MAP2K2; 601263 ）、ERK1（MAPK3; 601795 ） 和 ERK3（MAPK6; 602904） 作为可能参与介导 2B4 和 GSK3/CTNNB 之间信号通路的蛋白质，并发现其中一些元素在 XLP NK 细胞中异常。Aoukaty 和 Tan（2005）得出结论，GSK3 和 β-连环蛋白在 NK 细胞中介导 2B4 信号传导，并且 2B4 和 GSK3/β-连环蛋白之间的转导途径中的一些元件功能障碍可能导致 IFNG（ 147570 ） 分泌减少和XLP患者NK细胞的细胞毒功能。

瓦茨尔等人（2000）表明抗体介导的 2B4 交联导致其快速酪氨酸磷酸化，这是 2B4 介导的杀伤细胞活性所必需的。然而，这种活性和 2B4 磷酸化可以通过 2B4 和抑制性受体，例如 KIR2DL1 或 CD94（ 602894 ） 的结合来阻断。

▼ 基因结构

通过Southern印迹分析，Boles 等人（1999）确定 2B4 基因跨度约为 25 kb。

▼ 测绘

唐野等人（1999）将 2B4 基因对应到 1q22，SLAM、CD48、CD84（ 604513 ） 和 LY9 也位于该位置。

▼ 分子遗传学

铃木等人（2008）确定了 CD244 基因中导致类风湿性关节炎易感性的功能性单核苷酸多态性（SNP）（ 180300 ）。

▼ 动物模型

Vaidya 等人（2005）产生了缺乏两种 Cd244 同种型的小鼠。Cd244 -/- 小鼠看起来很健康并且发育正常。雌性 Cd244 -/- 小鼠的未成熟胸腺 Cd4 阴性/Cd8 阴性细胞略有增加，但 NK 细胞受体库在两种性别的 Cd244 -/- 小鼠中是完整的。与 Cd48 阴性黑色素瘤细胞相比，野生型小鼠对 Cd48 阳性黑色素瘤细胞的排斥较差。雄性 Cd244 -/- 小鼠对 Cd48 阳性黑色素瘤细胞的排斥反应增强，而雌性 Cd244 -/- 小鼠对 Cd48 阳性和 Cd48 阴性黑色素瘤细胞的抵抗力较差。NK 细胞耗尽的 Cd244 -/- 小鼠在体内和体外试验中没有显示出性别差异，这表明性别特异性效应可能是由 NK 细胞与其他免疫细胞的相互作用引起的。

▼ 等位基因变体（ 1 示例）：

.0001 类风湿性关节炎，易感性
CD244, rs3766379
Suzuki 等人对与类风湿性关节炎（ 180300 ） 易感性相关的 1.1-Mb 连锁不平衡片段进行了分析，涉及来自日本的 2 个孤立的类风湿性关节炎队列（2008 年）在 CD244 基因的内含子 5 中观察到rs3766379（P = 3.23 x 10（-8），优势比 = 1.31，置信区间 1.19-1.44）最显着的关联。SNP rs3766379位于热休克转录因子-1（HSF1）/HSF2/早期生长反应-2（EGR2） 结合位点和上游转录因子-1（USF1） 结合位点。易感性等位基因在荧光素酶和等位基因特异性转录定量测定中增加了 CD244 的表达。