含有 TUDOR 结构域的蛋白质 3

TDRD3 是一种多功能蛋白，在细胞核中充当转录共激活因子，在细胞质应激颗粒中充当支架蛋白（ Yang et al., 2010 ）。

▼ 克隆与表达

通过搜索具有 SMN 的 tudor 域的数据库（见600354），然后是 PCR 和脑 cDNA 文库的 5-prime 和 3-prime RACE，Linder 等人（2008）克隆了人类 TDRD3。推导出的 744 个氨基酸蛋白具有 N 端寡糖/核苷酸结合（OB）折叠、中央泛素（ 191339 ）相关（UBA）结构域和 C 端 tudor 结构域。Northern印迹分析检测到一个2.9-kb 的转录本，在所有检查的组织中都有不同的表达。人类细胞系的免疫荧光分析揭示了强烈的细胞溶质定位，具有核周积累和更弱的核染色。HeLa 和 293T 细胞的蛋白质印迹分析表明，TDRD3 的表观分子量约为 83 kD。

孤立地，Goulet 等人（2008）克隆并表征了 TDRD3。分离的 HeLa 细胞的蛋白质印迹分析检测到 TDRD3 的表观分子量为 83 kD，主要在胞质部分中，在核和核不溶性部分中的量要低得多。

▼ 基因功能

林德等人（2008）发现 TDRD3 的分离的 UBA 结构域与通过 lys48 在四泛素链中连接的泛素结合，但不与单泛素、lys63 连接的泛素或 SUMO1（ 601912 ）结合。对人脑 cDNA 文库的酵母 2 杂交分析显示 TDRD3 与 FXR1（ 600819 ）相互作用。蛋白质下拉和免疫共沉淀实验表明，TDRD3 还与 FMRP（FMR1；309550）和FXR2（ 605339 ）相互作用。HeLa 细胞中 TDRD3 或亚砷酸盐的过表达导致形成含有 TDRD3、FMRP、DAP5（EIF4G2; 602325 ）和 TIAR（TIAL1; 603413 ）的应力颗粒）。突变分析表明，TDRD3 tudor 结构域的 C 末端区域与 FMRP 中的 2 个孤立结构域相互作用。林德等人（2008）发现与脆性 X 综合征（ 300624 ）相关的 FMRP 中的 ile304 到 asn（I304N; 309550.0001 ）突变消除了 TDRD3 和 FMRP 之间的相互作用。

孤立地，Goulet 等人（2008）将 TDRD3 鉴定为细胞质应激颗粒的一个组成部分。TDRD3 在亚砷酸盐诱导的细胞应激时积累在应激颗粒中，并与 FMRP 和 RNA 结合蛋白 G3BP（ 608431 ）共定位。FMRP 和 TDRD3 都遵循从正常和压力 HeLa 细胞中分离出来的多核糖体，沿着尺寸排除柱。突变分析表明，TDRD3 的 tudor 结构域对于亚砷酸盐处理后 TDRD3 重新定位到应力颗粒是必要和充分的。蛋白质下拉实验表明，TDRD3 与参与处理 RNA 的蛋白质相互作用，包括富含精氨酸和甘氨酸的蛋白质 EWS（EWSR1; 133450 ）、FUS（ 137070 ）、DDX3（DDX3X;300160 ）、SERBP1（ 607378 ）和 EEF1A1（ 130590 ）。古莱特等人（2008）指出，tudor 结构域是对称的二甲基化精氨酸（sDMA）结合基序，他们发现 TDRD3 的分离的 tudor 结构域在体外结合固定的 sDMA。TDRD3 的都铎域内 glu691 突变为 lys（E691K）消除了这种相互作用。E691K 突变还消除或削弱了 TDRD3 与 EWS、FUS、DDX3 和 EEF1A1 的相互作用，并减少了 TDRD3 向应激颗粒的募集。

杨等人（2010）筛选了一个蛋白质结构域微阵列，寻找可以读取与转录激活相关的甲基精氨酸标记的分子。他们发现 TDRD3 与由 PRMT1（ 602950 ）催化的组蛋白 H4（参见602822 ） arg3（H4R3me2a ）和由 CARM1（ 603934 ）催化的 H3R17me2a（参见602810 ）上的激活不对称二甲基精氨酸标记结合。TDRD3 识别 SDMA 标记 H4R3me2s，但较弱。TDRD3 在雌激素受体（ER 或 ESR1；133430）和雄激素受体（AR；313700）依赖的报告基因检测。染色质免疫沉淀序列分析显示，TDRD3 通常与转录起始位点相关，并且在 MCF7 人乳腺癌细胞中以 CARM1 依赖性方式与 pS2（TFF1; 113710 ）启动子相关。MCF7 细胞中内源性 TDRD3 的敲除降低了 ER 依赖性报告基因的活性，并降低了 TFF1、NRAS（ 164790 ）和 DDX5（ 180630 ）的表达。杨等人（2010）得出结论，TDRD3 是一种甲基精氨酸结合蛋白，在细胞核和细胞质中具有不同的作用。他们假设在细胞核中，TDRD3 是 CARM1 和 PRMT1 生成的甲基标记的效应分子，并作为转录共激活因子发挥作用。在细胞质中，TDRD3 在应激颗粒中积累以响应应激并作为支架分子发挥作用。

▼ 基因结构

古莱特等人（2008）确定 TDRD3 基因包含 14 个外显子，跨度约为 176.5 kb。外显子 14 是非编码的。

▼ 测绘

古莱特等人（2008）指出 TDRD3 基因对应到染色体 13q21.2。