核糖核酸酶 K
核糖核酸酶(RNases),例如 RNASEK,催化聚合 RNA 的降解并参与各种生物事件( Economopoulou et al., 2007 )。RNASEK 是一种与液泡 ATP 酶(V-ATP 酶;见607027)结合的跨膜蛋白,是内吞作用所必需的。RNASEK 也是人类鼻病毒、甲型流感病毒和登革热病毒复制所必需的(参见614371)(Perreira 等人,2015 年)。
▼ 克隆与表达
通过在数据库中搜索昆虫 RNA 酶的直系同源物,然后进行胎盘 RNA 的 RT-PCR,Economopoulou 等人(2007)克隆了人类 RNASEK。推导出的 98 个氨基酸蛋白质高度保守,计算分子量为 11.0 kD。Northern印迹分析揭示了一个0.7-kb转录本在正常人体组织中的普遍表达,而EST数据库分析表明在正常和癌变人体组织中广泛表达。酵母表达的人 RNASEK 的 SDS-PAGE 分析显示 19-kD 蛋白质。
Karousis 和 Sideris(2014)克隆了一个由内含子 1 中 4 个核苷酸缺失引起的 RNASEK 变体。推断的蛋白质包含 134 个氨基酸并具有 2 个跨膜结构域。蛋白质印迹和免疫荧光分析证明了在多种人类细胞中的细胞质表达。
▼ 基因功能
Economopoulou 等人(2007)发现重组人 RNASEK 优先切割 ApU 和 ApG 磷酸二酯键,对 UpU 键的活性较低。RNASEK 不耐热,在 60 摄氏度预孵育 10 分钟后失去大部分活性。
Perreira 等人使用 RNA 干扰筛选来识别改变人类鼻病毒复制的宿主蛋白,然后进行额外的实验(2015)表明 RNASEK 是人类鼻病毒和其他 RNA 病毒进入和复制所必需的。共免疫沉淀分析和共聚焦显微镜证实了 RNASEK 与 ATP6AP1( 300197 ) 的关联和共定位。RNASEK 是内吞作用所必需的,特别是霍乱毒素 B,并且与 ATP6V0B( 603717 ) 一样,它介导葡聚糖和转铁蛋白(TF; 190000 ) 的摄取。RNASEK 或 V-ATPase 的缺失增加了内溶酶体酸度并导致网格蛋白包被的凹坑扩大。佩雷拉等人(2015)得出结论,RNASEK 调节细胞膜和内体途径中的 V-ATPase 水平,并且是 V-ATPase 功能所必需的。
▼ 基因结构
Economopoulou 等人(2007)确定 RNASEK 基因包含 3 个外显子,跨度约为 1.9 kb。
▼ 测绘
通过基因组序列分析,Economopoulou 等人(2007)将 RNASEK 基因对应到染色体 17p13.1。