淋巴畸形 4 ;血管内皮生长因子 C

VEGFC 基因编码血管内皮生长因子-3（VEGFR3）的配体，也称为 FLT4（ 136352 ），这是一种主要在淋巴内皮细胞中表达的受体酪氨酸激酶（ Joukov 等人，1996 ）。

▼ 克隆与表达

朱科夫等人（1996）使用亲和层析分离 FLT4 的配体。他们发现它是一种 23 kD 的多肽，并确定了它的 N 端蛋白质序列。基于此 N 端序列的简并寡核苷酸用于从人 PC-3 细胞 cDNA 文库中克隆相应的 cDNA。得到的克隆被命名为 VEGFC。李等人（1996）使用基于来自 EST 文库的序列的探针从人神经胶质瘤 G61 细胞 cDNA 文库（GenBank HSC1WF111 ）克隆 VEGFC。Joukov 等人的序列分析（1996）表明全长克隆包含 419 个氨基酸的开放解读码组，其 VEGF 同源区与 VEGF 30% 相同，与 VEGFB/VRF 相同 27%（ 601398）。N 末端包含一个推定的分泌信号序列（prepro-VEGFC）。Joukov等人（1996）和李等人（1996）注意到 VEGFC 的 C 末端具有富含半胱氨酸的重复单元，这是蠓摇蚊的 Balbiani 环 3 蛋白（BR3P）的特征。Joukov 等人进行的转染试验（1996）建议 VEGFC 形成二硫键连接的二聚体并且可以激活 FLT4 和 KDR/FLK1 受体酪氨酸激酶。李等人（1996）使用纯化成分的竞争性结合表明 VEGFC 和 FLT4 以高亲和力结合，表明 VEGFC 是 FLT4 的生物学相关配体。朱科夫等人（1996）还证明了来自表达 VEGFC 的细胞的条件培养基可以刺激胶原凝胶基质中内皮细胞的生长。

▼ 测绘

通过体细胞杂交分析和荧光原位杂交，Paavonen 等人（1996）将 VEGFC 基因定位到染色体 4q34。

▼ 基因功能

洪等人（2003）研究了 VEGFC 的差异表达是否可以解释甲状腺癌中淋巴结转移的不同倾向。他们使用实时定量 PCR 分析了 111 个正常和肿瘤性甲状腺组织。乳头状甲状腺癌（见188550）的 VEGFC 表达高于其他甲状腺恶性肿瘤（P 小于 0.0005 ANOVA）。同一患者甲状腺癌和正常甲状腺组织之间 VEGFC 表达的配对比较显示，甲状腺乳头状癌中 VEGFC 表达显着增加，甲状腺髓样癌中 VEGFC 表达显着降低（155240）。相比之下，在其他类型的甲状腺癌中，癌组织和正常组织之间的VEGFC表达没有显着差异。

马赫尼克等人（2009）证明大鼠的高盐饮食会导致间质高渗 Na（+）在皮肤中积累，从而导致毛细淋巴管网络的密度增加和增生。发现潜在机制涉及渗透皮肤间质的单核吞噬细胞中的张力响应增强子结合蛋白（TONEBP; 604708 ）的激活，其结合 VEGFC 基因启动子并导致巨噬细胞分泌 VEGFC。可溶性 VEGFR3（ 136352 ）消耗单核吞噬细胞或 VEGFC 捕获阻断 VEGFC 信号传导，增加间质高渗容量保留，减少内皮一氧化氮合酶（NOS3; 163729）表达，并响应高盐饮食而升高血压。马赫尼克等人（2009 年）得出结论，单核吞噬细胞中的 TONEBP-VEGFC 信号传导是细胞外容量和血压稳态的主要决定因素，并且 VEGFC 是与盐诱导的高血压密切相关的渗透压敏感性、高渗驱动基因（见145500）。

通过筛选免疫相关蛋白及其受体以进行细菌或 LPS 诱导的表达，Zhang 等人（2014）检测到巨噬细胞中 VEGFR3 和 VEGFC 的上调。在感染性休克的患者和小鼠模型中，血清 VEGFC 也有所增加。VEGFC 与 VEGFR3 的连接减弱了促炎细胞因子的产生。在没有 Vegfr3 的配体结合域或酪氨酸激酶活性的情况下，小鼠对感染性休克变得更加敏感。Vegfr3通过调节 PI3K（参见601232 ）-Akt（参见164730 ）信号通路和 Socs1（ 603597 ）表达来抑制 Tlr4（ 603030 ）-NFKB（参见164011 ）的激活。张等人（2014）提出除了靶向淋巴管外，通过 VEGFC 的 VEGFR3 信号传导还可以防止微噬细胞对并发淋巴水肿的感染的过度反应。

宋等人（2020）使用胶质母细胞瘤小鼠模型表明，可以操纵脑膜淋巴管系统以对脑肿瘤产生更好的免疫反应。当肿瘤局限于中枢神经系统时，CD8 T 细胞介导的对胶质母细胞瘤抗原的免疫非常有限，导致肿瘤生长不受控制。然而，VEGFC 的异位表达促进了引流颈深淋巴结中 CD8 T 细胞的增强启动、CD8 T 细胞迁移到肿瘤中、胶质母细胞瘤的快速清除和持久的抗肿瘤记忆反应。此外，表达 VEGFC 的 mRNA 构建体的转染与检查点阻断疗法协同作用以根除现有的胶质母细胞瘤。

▼ 分子遗传学

在患有淋巴畸形 4（LMPHM4; 615907 ）的家族中，Gordon 等人（2013）鉴定了 VEGFC 基因中的杂合截断突变（c.571insTT; 601528.0001 ）。通过全外显子组测序发现的突变与家族中的疾病分离。斑马鱼的体外功能性细胞表达测定和研究表明，突变导致功能丧失而没有显性负效应，这与单倍体不足一致。在另外 16 名具有相似表型的患者中筛选 VEGFC 基因未发现任何突变。

在具有 LMPHM4 的 3 代高加索家族的 3 名成员中，Balboa-Beltran 等人（2014）鉴定了 VEGFC 基因中的杂合截断突变（R210X; 601528.0002 ）。通过外显子组测序发现的突变与家族中的疾病分离。未进行功能研究。

▼ 动物模型

卡凯宁等人（2004）在 Vegfc -/- 小鼠中观察到胚胎第 12.5 天的水肿和胚胎第 15 天后的致死率。免疫组织化学分析显示，淋巴管系统未能在 Vegfc -/- 小鼠中发育，这表明杂合子和野生型小鼠中存在的淋巴标记没有染色。免疫荧光显微镜检查表明，表达 Prox1（ 601546 ）（一种淋巴囊形成所需的蛋白质）的内皮细胞在 Vegfc -/- 小鼠的主静脉壁的早期时间点存在，但它们没有发芽形成颈静脉淋巴囊。卡凯宁等人（2004）得出结论，与 VEGFB 和 VEGFD（FIGF；300091 ）不同，VEGFC 和 VEGF 对于胚胎存活和淋巴管生成是必不可少的。

▼ 等位基因变体（ 2 示例）：

.0001 淋巴管畸形 4
VEGFC，2-BP INS，571TT
在 3 代白种人家族的 7 名成员中，有常染色体显性淋巴管畸形 4（LMPHM4; 615907 ），Gordon 等人（2013）鉴定了 VEGFC 基因外显子 4 中的杂合 2-bp 插入（c.571_572insTT），导致移码和过早终止（Pro191LeufsTer10）。通过先证者的全外显子组测序发现并通过 Sanger 测序确认的突变与家族中的疾病分离。将突变转染到 HEK293 细胞中表明，与野生型相比，突变变体的分泌受到严重损害。斑马鱼中突变蛋白的表达表明，与野生型相比，它的血管生成活性显着降低或可能不存在，这与功能丧失一致。没有证据表明显性负效应，Gordon 等人（2013）假设单倍体不足是一种疾病机制。

.0002 淋巴管畸形 4
VEGFC、ARG210TER
Balboa-Beltran 等人在患有淋巴畸形 4（LMPHM4; 615907 ）的 3 代高加索家族的 3 名成员中（2014）鉴定了 VEGFC 基因外显子 4 中的杂合 c.628C-T 转换，导致 arg210-to-ter（R210X）取代。通过外显子组测序发现并通过 Sanger 测序确认的突变与家族中的疾病分离。该变体针对 dbSNP 和 1000 Genomes Project 数据库以及内部外显子组数据进行了过滤。未进行功能研究。