三叶因子 1， TFF1 - 乳腺癌雌激素诱导序列

三叶蛋白，例如 TTF1，是稳定的分泌多肽，其特征是存在至少 1 个包含 3 个保守二硫键的 40 个氨基酸基序的拷贝。

▼ 克隆与表达
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贾科卢等人（1984）提供了从人乳腺癌细胞系 MCF-7 中分离的人 pS2 cDNA 的完整核苷酸序列。预测的蛋白质有 84 个氨基酸。

通过 Northern 印迹分析，Tomasetto 等人（1990）发现 pS2 和 SP 在正常人胃上皮中均有表达。他们指出，在大约 50% 的人类乳腺肿瘤中检测到 pS2 mRNA 和蛋白质表达。汉比等人（1993）发现人类 pS2 和 SP mRNA 以及 pS2 肽共定位于整个胃的胃小凹和表面上皮。基于 pS2 和 SP 的分布，作者认为两者都可能参与修复增强机制。

Itoh 等人使用 RT-PCR 和 cDNA 末端快速扩增的组合（1996）从胃中克隆并测序了大鼠 pS2 cDNA。推导出的氨基酸序列与人和小鼠 pS2 蛋白的氨基酸序列非常相似。然而，除了三叶基序的高度保守的半胱氨酸残基外，该氨基酸序列与其他大鼠三叶肽如SP（Tff2）和肠三叶因子（Itf或Tff3）的氨基酸序列有很大不同。Northern印迹表明大鼠pS2在胃和十二指肠中表达，但不在远端小肠、大肠、直肠、脑、肝、睾丸或其他组织中表达。

▼ 基因功能
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罗伯茨等人（1988）证明 pS2 基因在 MCF-7 细胞中被雌激素转录诱导。从 -3000 到 +10 个碱基对的 5 级侧翼序列似乎在Roberts 等人使用的系统中充当雌激素诱导型启动子（1988）。

Metivier 等人使用染色质免疫沉淀分析（2003）鉴定了由 ESR1（ 133430 ）在雌二醇治疗后的乳腺癌细胞系中募集到 pS2 启动子的蛋白质复合物，并且他们确定了募集复合物的顺序。

伊藤等人（1996）检查了在醋酸诱导的结肠炎过程中大鼠 pS2、大鼠 SP 和大鼠 Itf 的表达。他们在结肠炎的急性期检测到 pS2 mRNA，但在恢复期或正常对照中没有检测到。

通过将常规生化方法与质谱法相结合，Chutipongtanate 等人（2005）发现正常人尿液中的 TFF1 抑制草酸钙晶体的生长。尿液 TFF1 显示出类似于肾钙素的抑制效力，并且抑制作用是剂量依赖性的，并且被 TFF1 抗血清抑制，特别是被针对 TFF1 C 末端的抗血清抑制。特发性草酸钙肾结石患者尿液中 TFF1 的浓度和相对量显着低于对照组。Chutipongtanate 等（2005）提出了一个模型，其中 TFF1 的 4 个 C 端谷氨酸残基与钙离子相互作用以防止草酸钙晶体生长。

Metivier 等人（2008）提出了 DNA 甲基化在人类细胞基因调控中的意外动态作用的证据。周期性的、链特异性甲基化/去甲基化发生在 pS2/TFF1 基因启动子被雌激素激活的转录循环过程中。DNA 甲基转移酶在这些循环中表现出双重作用，参与 CpG 甲基化和（5m）CpG 通过脱氨基作用的主动去甲基化。该过程的抑制阻止了 pS2 基因启动子的去甲基化及其随后的转录激活。Metivier 等人（2008）得出的结论是，启动子 CpG 甲基化状态的循环变化可能代表转录实现中的关键事件。

Kangaspeska 等（2008）孤立表明，CpG 二核苷酸的循环甲基化和去甲基化，周期约为 100 分钟，是人类细胞中 5 个选定启动子的特征，包括雌激素（E2）响应 pS2 基因。当pS2的基因活跃转录，DNA甲基化的雌激素受体-α的循环占用后发生（ESRA; 133430）和RNA聚合酶II（见180660）。此外，Kangaspeska 等人（2008）报道了在 pS2 表达静止且近端启动子被甲基化的细胞系中引发 pS2 启动子甲基化循环的条件。这与 ER-α 和 pS2 转录物的低水平再表达相吻合。

▼ 基因结构
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Jeltsch 等人（1987）报道人类 pS2 基因由 3 个外显子组成，长度小于 5 kb。

▼ 测绘
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BCEI 基因被分配到 21 号染色体（Cohen-Haguenauer 等，1985；Moisan 等，1985）。此外，Moisan 等人（1985）原位杂交表明该基因位于片段21q22.3，这是唐氏综合症的关键片段。他们还展示了 BamHI 的 RFLP。莫伊桑等人（1988）使用一组体细胞杂交系将基因定位到 21 号染色体。他们描述了 BstE2 RFLP。沃特金斯等人（1987）发现 BCEI 基因与位于 21q22.3 的 2 个 DNA 标记密切相关（theta = 0.0，两者的对数得分都很高）。

塞布等人（1997）发现 pS2、TFF2（ 182590 ）和 TFF3（ 600633 ）基因聚集在一个跨越 55 kb 的区域内。May 和 Westley（1997）确定 TFF1 和 TFF2 基因之间的物理距离仅为 12.5 kb。这两个基因似乎是由基因复制产生的。TFF1 和 TFF2 基因具有相似的表达模式，表明它们可能共享共同的调控元件。

▼ 动物模型
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为了阐明通常在胃粘膜中表达并存在于上皮细胞质中的 pS2 三叶肽的功能，Lefebvre 等人（1996）通过同源重组破坏了小鼠 pS2 基因。他们证明 mpS2 +/+ 小鼠和 mpS29 +/- 小鼠分别表达了高水平和中等水平的 mpS2 蛋白，而 mpS -/- 小鼠没有显示出可检测的表达。当杂交时，mpS2 -/- 小鼠是可育的，并且没有胚胎致死的证据。对 mpS2 -/- 小鼠组织的组织学检查显示，除胃外，其他器官均正常。在 3 周大的幼崽中，胃窦和幽门粘膜更厚。在第 5 个月时，所有检查的 mPS2 -/- 小鼠都表现出环绕整个胃幽门粘膜的圆周腺瘤。衬在表面的上皮细胞和细长的粘膜凹坑显示高度发育不良。在 30% 的 5 个月大的 mpS2 -/- 小鼠中，在腺瘤内观察到 2 到 5 个癌灶。Lefebvre 等人（1996）报道 mpS2 -/- 小鼠小肠中的固有层（LP）变厚并含有炎症细胞。肠绒毛内衬的上皮细胞正常。作者认为 pS2 蛋白可能发挥保护功能，并且它的缺失可能导致肠粘膜屏障缺陷，并伴有局部淋巴组织增生反应。由于所有 mpS2 -/- 小鼠都发展为胃腺瘤，但只有 30% 发展为胃癌，Lefebvre 等人（1996）得出结论，pS2 蛋白的损失可能不足以导致恶性肿瘤。他们指出，大约 50% 的人类胃癌已经失去了 pS2 的表达，并且已经从胃癌中分离出了异常的 pS2 转录本。