RHESUS血型，CcEe 抗原

RHCE 基因编码恒河猴（Rh）血型系统（ 111680 ）的 C/c 和 E/e 抗原。

▼ 克隆与表达
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Cherif-Zahar 等（1990）从人骨髓 cDNA 文库中分离出编码人血型 Rh 多肽的 cDNA 克隆，使用 PCR 扩增的 DNA 片段编码已知的 Rh 蛋白的共同 N 端区域。开放解读码组的翻译表明，Rh 蛋白由 417 个氨基酸组成，包括在成熟蛋白中去除的起始蛋氨酸，它缺乏可切割的 N 端序列，并且它没有潜在的共有位点N-糖基化。亲水性分析和二级结构预测表明存在 13 个跨膜结构域，表明 Rh 多肽高度疏水并深埋在磷脂双层中。在 Northern 分析中，Rh cDNA 探针检测到一个主要的 1.7-kb 和一个次要的 3。

Mouro 等人使用从网织红细胞 mRNA 扩增的 cDNA（1993）研究了纯合 dCe、dcE 和 dce 单倍型的 Rh 阴性个体的 CcEe 基因差异。RNA 分析之后是使用来自携带一系列常见 Rh 单倍型的供体的基因组 DNA 对特定外显子进行 PCR 扩增。Ee 多肽显示由 CcEe 基因的全长转录物合成，长度相同（417 个残基），序列与 D 多肽非常相似。Cc 多肽由相同 CcEe 基因序列的较短转录物合成，但剪接以排除外显子 4、5 和 6 或外显子 4、5 和 8。在这两种情况下，外显子 5 中 226 处的残基与 Ee 相关多肽产物中省略了抗原性；见111700.0001和111700.0002。另见Hopkinson（1993）的评论。

▼ 测绘
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通过使用 Rh 蛋白探针的原位杂交，Cherif-Zahar 等人（1991）将包含 RHCE 基因的 Rh 血型基因座定位到染色体 1p36.1-p34.3。

▼ 基因结构
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Cherif-Zahar 等（1994）证明 RHCE 基因有 10 个外显子分布在 75 kb 以上。外显子 4 到 8 在不同的 RNA 异构体中交替剪接。初级延伸分析表明转录起始位点位于起始密码子上游83 bp处。造血和非造血（HeLa）细胞系和 Northern 印迹分析的研究表明 RH 基因座的表达仅限于红细胞/巨核细胞谱系。与此一致，在 RHCE 基因的启动子中鉴定了 SP1、GATA-1 和 Ets 蛋白（已知参与红细胞和巨核细胞基因表达的核因子）的假定结合位点。

苏托等人（2000）通过对淋巴细胞释放的 DNA 纤维进行 2 色荧光原位杂交（纤维-FISH）并使用 RHCE 和 RHD 基因的内含子 3 和 7 的 DNA 探针分析了 RH 基因的组织。6 个 Rh 阳性样本（2 个具有 D+C-c+E+e-，2 个具有 D+C+cE-e+，2 个具有 D+C+c+E+e+ 表型）显示存在2 个 RH 基因位于小于 200 kb 的区域内。非常有趣的是发现基因从端粒开始以逆向顺序排列：tel--RHCE（5-prime 到 3-prime）--RHD（3-prime 到 5-prime）--着丝粒。另一方面，正如预期的那样，2 个典型的 Rh 阴性样本（DC-c+E+e+）显示仅存在 1 个 RHCE 基因。

Wagner 和 Flegel（2000）表明 RH 基因座代表一个基因簇：RHD（ 111680 ）和 RHCE 通过它们的 3 素尾端相互面对，第三个基因SMP1（ 605348 ）散布在 2 个恒河猴基因之间. RHD 基因缺失被一个不等的交叉事件简单地解释了。RH 基因的相反方向可能促进两个恒河猴基因之间的基因转换，这将解释杂交等位基因的高频率。

Cartron 和 Agre（1993）回顾了 Rh 血型抗原的蛋白质和基因结构。总之，Rh 阳性者有 2 个 Rh 基因，1 个编码携带 Cc 和 Ee 的蛋白质或更可能是蛋白质，第二个编码携带 D 的蛋白质，而 Rh 阴性者只有 1 个 Rh 基因，上面描述的 2 中的第一个。

卡特龙等人（1995）为 Rh 血型系统的 2 基因模型辩护。他们认为 RHCE 基因通过初级转录本的选择性剪接来编码 C/c 和 E/e 蛋白。通常，D 阳性和 D 阴性个体根据 RHD 基因（ 111680 ）的存在与否而有所不同；在一些澳大利亚原住民和黑人中，存在 RHD 基因的片段或无功能的 RHD 基因。斯迈思等人（1996）发现 c 和 E 抗原在用单个 cDNA 转导 K562 细胞后都表达，表明 c 抗原不会通过 RHCE 基因产物的选择性剪接（外显子跳跃）产生。

▼ 分子遗传学
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Rh-Null，非晶型

Rh-null 表型有 2 种类型。最常见的类型称为“调节器类型”，通过抑制机制发生；参见 RHNR，268150。这种形式是由常染色体隐性抑制基因的纯合子引起的，该基因在遗传上孤立于 Rh 基因座，定位到 3 号染色体而不是 1 号染色体。第二种类型的 Rh-null，首先在日本家族（Ishimori 和Hasekura, 1967 ），被称为“非晶型”（RHNA; 617970 ），由 Rh 基因座上一个沉默等位基因的纯合子产生。

在对 42 个 Rh-null 表型实例的调查中，Nash 和 Shojania（1987）发现只有 5 个是非晶型。佩雷斯-佩雷斯等（1992）描述了一个西班牙家庭，其中一个沉默的 Rh 基因正在分离，导致在其父母是第一代表亲的提议者中产生了 Rh-null 的无定型类型。她患有严重的溶血性贫血。用分别针对 Rh 多肽和 LW 糖蛋白的糖基化非依赖性抗体进行的蛋白质印迹分析证实，这些蛋白质成分不存在于原虫的红细胞中。

埃文斯表型

在通过位于苏格兰邓迪的苏格兰东部输血服务中心确定的一个 3 代家庭中，Huang 等人（1996）发现导致白内障的突变与称为 Evans 表型的 Rh 型常染色体显性异常共分离。地理和遗传联系表明白内障的形式可能与丹麦家族相同（见115665）。红细胞 Evans 表型由杂交 RH 基因产生，其中来自 RHD 基因的外显子 2-6 被转移到 RHCE 基因。肯普等人（1996）还检查了 5 个不相关的 Rh D-纯合子，发现其中 4 个的 RHCE 序列已被 RHD 序列取代。这些重排的 5-prime 末端发生在外显子 2 周围 4.2-kb 的间隔内。然而，在重排基因的 3-prime 末端存在异质性，表明它们在血统上并不相同，而是孤立重组事件发生在一个小的基因组间隔内——一个重组热点。

其他协会

Roychoudhury 和 Nei（1988）列出了等位基因变异的基因频率数据。

瓦伦苏埃拉等（1991）报道了圣地亚哥智利小学人群的血浆总铁结合力（TIBC）和 Cc Rh 特异性之间的强关联。瓦伦苏埃拉等（1995）在哥伦比亚麦德林的大学生中发现了类似的结果。

▼ 群体遗传学
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RHCE 和 RHD 基因编码区之间的高度同源性与祖先基因重复一致。卡里特等人（1997）得出结论，人类谱系始于单倍型 cDe。这与它在非洲黑人及其后代中非常高的发病率一致（0.4 到 0.5，而其他地方不到 0.1）。RhD-表型（cde）的常见单倍型几乎可以肯定代表 cDe 导致 RHD 的丧失。这种单倍型在一些原住民群体中完全不存在，例如澳大利亚人、爱斯基摩人和纳瓦霍人。考虑到由胎母不相容性强加的针对 RHD+/- 杂合子的中度至强选择，RhD-单倍型如何在占主导地位的 RhD+ 群体中建立仍然未知。正如 1942 年首次指出的那样Haldane（1942）和Hogben（1943）、Li（1953）和其他人重新审查，针对杂合子的选择导致不稳定的种群平衡。在扩展模拟研究中，Feldman 等人（1969）得出的结论是，虽然 RhD- 母亲的生殖补偿原则上可以在面对这种选择时导致稳定的平衡，但其他力量，例如杂合子优势，必须起作用以维持 RhD+:RhD- 比率在他们观察到的水平。

▼ 进化
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Fisher 和 Race（1946）提出了一个 RH 多态性进化模型，其中较不常见的单倍型（CDE、Cde、cdE 和 CdE）是通过从较高频率发现的那些进行重组而产生和维持的。假定的亲本和重组单倍型的频率比表明排列 DCE 最有可能在交叉假设下。当时，他们假设 3 个系列的抗原由 3 个孤立的基因编码；前面概述的工作表明有 2 个。因此，编码 C/c 和 E/e 的位点之间的重组将是基因内的，并且发生在相距约 30 kb 的外显子之间（Cherif-Zahar 等，1994）。卡里特等人（1997）提供了人类历史上发生过一次的非互惠基因间交换（基因转换）的直接证据，以产生常见的 RHCE 等位基因 Ce。他们还使用新的多态性来构建单倍型，这表明基因内重组在不太常见的单倍型的产生中起主要作用，但前提是 RHD 位于 RHCE 的 3-prime，即顺序是 CED。他们提供了支持这种安排的遗传和物理证据。

恒河猴基因的复制发生在灵长类动物进化过程中（Matassi et al., 1999），从而在人类中产生了 RHD 和 RHCE 基因。因此，非灵长类哺乳动物，例如小鼠，可能会揭示 RH 基因座的古老状态。考虑到这一点，Wagner 和 Flegel（2002）分析了该区域的序列。根据基因位置和方向，确定 RHCE 代表祖先状态。在小鼠 RH 基因座中也观察到人类已知的 SMP1 和 RH 的接近。瓦格纳和弗莱格尔（2002）得出的结论是 RHD 是由 RHCE 的重复引起的。在这次事件中，RHD 的方向可能被颠倒了。所谓的恒河猴框，即位于 RHD 基因侧翼的两个 9,000 bp DNA 片段，可能有助于复制。

▼ 历史
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RH，elliptocytosis（611804），PGM1（171900），和6PGD（172200）是相同的染色体上的所有。前两个位点似乎位于后两个位点之间（Renwick，1971）。来自细胞杂交研究的信息将 Rh-椭圆形细胞增多症-PGM（1）-6PGD 连锁群置于 1 号染色体上。Jacobs 等人（1970）报告的数据表明，1 号染色体长臂末端附近的易位断点与 Rh 之间存在松散的联系。拉姆等人（1970）发表的家族数据与 Duffy（ 110700 ）和 PGM1 的松散联系一致。Renwick（1971）提出 PGM1 位于 Rh 的一侧，远离 6PGD，距 Rh 约 30 厘摩。库克等人（1972）证实了这个区间。虽然 Rh 和 Duffy 基因座都在 1 号染色体上，但它们相距太远，无法在家庭研究中证明连锁（Sanger 等，1973）。

马什等人（1974）在患有骨髓纤维化的 Rh 阳性男性中发现了 Rh 阴性红细胞。有核的造血前体在他的血液中循环，这些细胞具有异常的染色体补体，其中 1 号染色体短臂的一部分已被删除。他们得出结论，Rh 基因座可能位于短臂远端部分 1p32 和短臂末端之间的某个点。该结论与Douglas 等人的发现一致（1973）与 Rh 相关的 PGM1 基因座位于 1 号染色体的短臂上。由于Marsh 等人的患者（1974）没有删除突变克隆中的 PGM1 基因座，Rh 基因座可能位于 PGM1 基因座的远端。

科尼等人（1977）在 α-岩藻糖苷酶基因座（FUCA1; 612280 ）和 Rh 基因座之间的 58 次机会中仅观察到 1 次重组。Rh 抗原仍然没有化学定义（Tippett，1978），但它被认为是一种脂蛋白。尚未描述在假定的基因复合物中重组的完全确定的例子。

Steinberg（1965）描述了一个 Hutterite 家庭，其中父亲是 CDe-cde，母亲是 cde-cde，4 个孩子是 cde-cde，3 个孩子是 CDe-cde，还有 1 个孩子（第 6 胎）Cde-cde。Steinberg（1965）认为这是一个交叉的例子。突变和不太可能的 D 抗原的隐性抑制因子被认为是其他可能性。Race 和 Sanger（1975）认为可能是隐性抑制因子（该教派的习俗和标记研究排除了非法行为。）罗森菲尔德（1981）写道：“我们仍然对Rh一无所知。除了 Steinberg 的一个交叉之外，紧密单倍型包装中 Rh 抗原的遗传没有任何例外。希望可以分离出 Rh 抗原以进行表征，但自Plapp 等人的报告以来一直没有发表任何内容（1979） .'

斯坦伯格等人（1984）重新检查了 Hutterite 家族，利用其他被认为在 1p 上的标记（6PGD，Colton，UMPK1）并得出结论，确实发生了交叉或突变（科尔顿可能不在染色体 1p 上；UMPK1 在关键亲本中没有提供信息（刘易斯，1989 年）。）他们进一步得出结论，如果从其他证据看来，C 位于 D 和 E 之间，则他们的数据表明 D基因（ 116800 ）位于 Rh 复合物中的远端（端粒）。这个顺序与罕见的 Rh 单倍型 D. Race 等人一致（ 1950 , 1951 ）认为这种单倍型代表了人类 Rh 染色体中可能或可能的缺失。种族与桑格（1975）列出了该单倍型的 20 个纯合子。它们来自不同的种群，在大约 80% 的情况下，它们是近亲交配的产物。奥拉夫斯多蒂尔等人（1983）得出的结论是，这种恒河猴单倍型在冰岛并不罕见。他们估计频率约为 214 人中的 1 人。由于交叉匹配困难，他们在 2 名无关女性中发现了单倍型。两者都形成了 Rh 抗体，一种是由输血引起的，另一种是由 3 次怀孕引起的。

萨博里等人（1988）从 Rh（D）阳性和阴性血液中纯化出相对大量的 Rh 蛋白。发现 2 种蛋白质的肽图存在差异。布兰查德等人（1988）提供了基于免疫学和生化研究的间接数据，证明红细胞膜的 Rh D、c 和 E 多肽是同源但不同的分子种类，可以物理分离和分析。这些多肽的分子量约为 32,000。Blanchard 等人发现了多肽 c 和 E（1988）彼此之间的关系比与 D 的关系更密切。所有的观察结果都与 Rh 蛋白家族的同源成员之间的部分分歧一致。在 1988 年初完成的审查中，Issitt（1988）建议，目前的分子遗传学方法最终可以结束 50 年来关于 Rh 血型遗传测定的猜测。

Rosenfield（1989）描述了 Wiener 和 Levine 之间的激烈分歧，特别是在发现的优先级问题上。Mollison（1994）回顾了 AS Wiener 之间的分歧，他假设单个基因座有多个等位基因（ Wiener, 1943 ）和 RA Fisher之间的分歧，后者将 RR Race（1944）的数据解释为与 3 个密切相关基因的存在最相容.

整体遗传的 3 组 Rh 抗原——D、Cc 和 Ee——是代表单个蛋白质上的不同表位（由Wiener维持，1944 年）还是由紧密相连的基因编码的多个孤立蛋白质（如最初提出的那样）自从 1940 年代初期发现 Rh 抗原以来，Fisher 在 1944 年（ Race, 1944 ））一直存在争议。Cherif-Zahar 等（1990）引用了Blanchard 等人的工作（1988）表明 Rh D、c 和 E 抗原由 3 种不同但同源的膜蛋白携带，这些膜蛋白具有共同的 N 端蛋白序列。这些可能是具有多个剪接选择的一个基因的产物。另见Agre 和 Cartron（1991）的评论。

科林等人（1991）在 Rh 基因座的 Southern 分析中使用 Rh cDNA 作为探针。他们证明，在所有 Rh D 阳性的人中，每个单倍体基因组都存在 2 个强相关的 Rh 基因，而这 2 个基因中的 1 个在 Rh D 阴性供体中缺失。科林等人（1991）得出结论，Rh 基因座的 2 个基因中的一个编码 Rh C/c 和 Rh E/e 多肽，而另一个编码 Rh D 蛋白（Fisher 和 Wiener 都部分正确。）Rh D 阴性基因组中不存在任何 D 基因及其假定的等位基因形式 d，这解释了为什么从未证明过 Rh d 抗原。

Cherif-Zahar 等人的调查（1993）未能揭示沉默型 Rh-null 中 RH 基因和转录物的任何改变，他们怀疑这些变体具有 RH 基因的转录或转录后改变。Cherif-Zahar 等（1996）分析了 RH 基因座并测序了由常染色体抑制基因（reg 和 mod 类型）引起的 5 个 Rh 缺陷表型的 Rh 转录本。他们无法发现任何异常；这些变体不表达 RH 基因，但确实将功能性 RH 基因座从一代传到下一代。他们还没有检测到 CD47 基因结构的明显改变。转录物很容易扩增，核苷酸序列与对照相同。这与结合研究一致，表明 CD47 存在于 Rh 缺陷细胞的红细胞表面，尽管严重减少（对照组的 10-15%）。总的来说，他们的发现表明，当 Rh 蛋白不存在时，CD47 在 Rh 缺失红细胞上的低表达是由于组装或转移到细胞表面的缺陷造成的。

▼ 等位基因变体（ 6 精选示例）：
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.0001 RH E/e 多态性
RHCE, PRO226ALA
穆罗等人（1993）表明经典等位基因对立 E 和 e 抗原之间的差异取决于外显子 5 中的点突变，该突变将 e 等位基因中第 226 位残基处的脯氨酸变为丙氨酸。

.0002 RH C/c 多态性
RHCE、CYS16TRP、ILE60LEU、SER68ASN 和 SER103PRO
穆罗等人（1993）表明经典等位基因对立 C 和 c 抗原之间的差异取决于导致 c 等位基因外显子 1 和 2 中 4 个氨基酸取代的点突变。

.0003 RH-NULL，变形类型
RHCE、2-BP DEL、966T 和 968A
如前所述，RH-null 疾病包括非晶型和调节型（见268150）类型，是一种罕见的遗传性疾病，其特征是口齿细胞增多症和慢性溶血性贫血。黄等人（1998）研究了一个德国家族，该家族遗传了一个假定的无定型 Rh-null（RHNA; 617970 ）疾病基因。他们分析了 Rh30、Rh50（ 180297 ）和 CD47（ 601028 ）的基因组和转录结构），这 3 个基因座被认为对红细胞膜中 Rh 复合物的表达最为关键。他们表明，在这个家族中，Rh50 和 CD47 转录本的一级序列是正常的。然而，除了 RhD 基因的缺失外，Rh30 基因座在 RHCE 基因的外显子 7 中还包含一个不寻常的双突变。该突变以多种排列方式靶向 2 个相邻的密码子，可能是通过微基因转换机制。一个方案需要 2 个核苷酸的非连续缺失，ATT（ile322）到 AT 和 CAC（his323）到 CC，而另一个涉及 T 到 C 转换，ATT（ile322）到 ATC，以及二核苷酸缺失，CAC（ his323）到 C。他们在开放解读码组中引起了同样的变化，预计编码一个具有 398 个氨基酸的短蛋白质。2 个跨膜结构域的丢失和新的 C 端序列的获得可能改变了蛋白质构象并损害了 Rh 复合物的组装。研究结果确定了无定形 Rh 无效疾病基因的分子身份，表明 Rh30 和 Rh50 对于作为质膜中多亚基复合体的 Rh 结构的功能都是必不可少的。这个家族中受影响的潜艇最初被描述为塞德尔等人（1972）。

Cherif-Zahar 等（1998）分析了Huang 等人研究的一名患者（DR）（1998）并将核苷酸变化描述为外显子 7 中的 TCA-C，导致来自残基 323 的新 C 末端序列和 398 个氨基酸的截短蛋白质（与野生型蛋白质中的 417 个）。

.0004 RH-NULL，变形类型
RHCE、IVS4、GT、+1
在Perez-Perez 等人先前报道的具有近亲家族的Rh-null amorph 表型（RHNA; 617970 ）的西班牙患者（DAA）中（1992） , Cherif-Zahar 等（1998）在 RHCE 基因（IVS4+1G-T）的内含子 4 的供体位点检测到纯合剪接位点突变。该突变激活了至少 3 个神秘的剪接位点。外显子 4 中的一个这样的位点产生了所有异常转录本。Southern 印迹分析表明 RHD 基因（ 111680 ）缺失。

.0005 RH-NULL，变形类型
RHCE，1-BP DEL，960G
在一名 23 岁的巴西白人女性和她的具有 Rh-null 非晶型表型（RHNA; 617970 ）的妹妹中，Rosa 等人（2005）检测到 RHCE 基因外显子 7 中核苷酸位置 960 和 963 之间的四重 GGGG 中单个 G 核苷酸缺失的纯合性。这种缺失在 gly231 之后引入了移码，并在 358 位引入了一个过早的终止密码子。近亲父母和兄弟是突变的杂合子。PCR 证明两姐妹中均不存在 RHD 基因（ 111680 ）。

.0006 RH-NULL，变形类型
RHCE、7-BP DUP、NT1044
Silvy 等人在一名 32 岁的利比亚妇女中，患有 Rh-null amorph 表型（RHNA; 617970 ），来自一个近亲家庭（2015）在 RHCE 基因的外显子 7 中检测到 7 bp 重复（c.1044_1050dup）的纯合性。在她的父母和 1 个兄弟中，重复出现在杂合子中。提议者、她的母亲和 1 个兄弟中的 RHD 基因被删除，而她的父亲和另一个兄弟携带野生型 RHD 等位基因。