流式新用：组织流式细胞术快速鉴定抗原助力复发难治B细胞恶性肿瘤CAR-T治疗靶点选择

近年来，嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法已广泛用于治疗复发/难治B细胞恶性肿瘤。
在CAR-T细胞治疗之前为了选择合适的抗原特异性CAR，需要明确肿瘤细胞上的靶抗原，通常是对骨髓（BM）标本进行多参数流式细胞（FCM）检测或对组织标本进行免疫组化（IHC）染色，FCM检测快速而准确而免疫组化染色耗时较长。一些B细胞恶性肿瘤患者仅具有肿块而没有BM浸润或浆膜腔积液（SCE），无法采用常规流式检测方法，而难治/复发患者肿瘤细胞生长迅速，急需尽快获知CAR-T治疗靶点及尽早治疗。本次ASH大会上，高博医学诊断中心流式细胞实验室喻新建主任报告了团队建立组织标本FCM快速鉴定抗原法，为患者随后的CAR-T治疗赢得更多的宝贵时间。

研究共纳入63例复发/难治B细胞恶性肿瘤患者，均为多线治疗失败后来我院中心接受CAR-T治疗者，包括11例急性淋巴细胞白血病（ALL）和52例非霍奇金淋巴瘤（NHL），中位年龄41岁（范围1-71岁）。标准抗体panels由前体B细胞的CD10 / CD20 / CD34 / CD19 / CD38 / CD45和成熟B细胞的kappa / lambda / CD10 / CD19 / CD20 / CD38 / CD45组成，可以根据患者的情况添加其他抗体。组织标本通过适当处理制成细胞悬液。流式获取的细胞从每管1000个到每管100,000个不等（5例<5,000和17例>100,000），可用于分析的肿瘤细胞占所有细胞的百分比为0.03％~99.44％（5例<5％和13例>90％）。我们有针对B-ALL和B-NHL的CD19-，CD20-和CD22特异性CAR-T细胞，选择何种CAR-T取决于肿瘤细胞的抗原表达，某些抗原部分表达或不表达或低表达的患者（PND表达）不适合进行相关抗原特异性CAR-T治疗。该组患者中除1例接受CD19 CAR-T治疗的ALL病例外，其余患者均表达CD19；因既往治疗中反复给予抗CD20抗体导致抗原减少或丢失，NHL患者中19.2％（10/52）CD20 PND表达，所有B-ALL患者均不表达或部分表达CD20；18.2％（2/11）ALL患者和13.5％（7/52）NHL患者观察到CD22 PND表达。所有流式结果在几小时内（<4～6小时）获得，显著快于IHC染色的时间（耗时数天）。

综上，正确选择靶抗原是复发/难治B细胞恶性肿瘤有效CAR-T治疗的基础，尤其是对于既往接受过抗体或CAR-T治疗的患者。对于没有BM浸润或SCE标本的患者，我们通过组织流式细胞检测提供了快速、准确而有效的抗原鉴定，为其随后CAR-T治疗的靶点选择奠定了基础，并为肿瘤快速增长的患者赢得了治疗时间。

参考文献
https://ash.confex.com/ash/2020/webprogram/Paper139341.html