微 RNA-377 过表达下调 SIRT1 的表达水平并促进肝癌细胞对索拉菲尼的敏感性
微RNA-377过表达下调SIRT1的表达水平并促进肝癌细胞对索拉菲尼的敏感性
陈 俊，丛秀峰，张婧超，郑 伟
MicroRNA-377 overexpression down-regulated SIRT1 expression and promotes the sensitivity of hepatocellular carcinoma cells to sorafenib
CHEN Jun, CONG Xiufeng, ZHANG Jingchao, ZHENG Wei
作者单位
中国医科大学附属盛京医院第一肿瘤病房，辽宁 沈阳 110000
AUTHORS FROM
Department of First Oncology Ward, Shengjing Hospital, China Medical University, Shenyang 110000, Liaoning Province, China
[摘要]
目的：探讨微RNA（microRNA，miRNA，miR）-377对组蛋白去乙酰化酶1（乙酰化酶 1，SIRT1）的调控作用，及对索拉菲尼敏感性的影响。
方法：采用实时荧光定量PCR法检测miR-377 mRNA在30例肝癌组织以及相应癌旁组织中的表达水平，及其在肝癌Huh7和HepG2细胞和正常肝细胞LO2中的表达水平。采用癌症和肿瘤基因图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库分析miR-377表达对于肝癌患者生存预后的影响。通过脂质体法将miR-377-模拟物（mimics）转入肝癌Huh7细胞，以转入阴性对照-mimics（negative control-mimics，NC-mimics）作为对照组；MTT法检测miR-377过表达后不同浓度的索拉菲尼对Huh7细胞活性的影响。通过Starbase位点分析miR-377的靶向基因，并采用荧光素酶报告基因系统验证miR-377是否直接靶向结合SIRT1基因。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测转染miR-377-mimics后对SIRT1 mRNA及蛋白表达水平的影响。采用脂质体法将miR-377-mimics和携带有SIRT1全基因的pcDNA3.1-SIRT1同时转入Huh7细胞，并再行索拉菲尼处理；分别用MTT法和克隆形成实验检测对Huh7细胞增殖能力的影响。
结果：miR-377在肝癌组织中的表达水平明显低于对应的癌旁正常肝组织（P＜0.05），miR-377在肝癌Huh7和HepG2细胞中的表达水平明显低于正常肝LO2细胞（P＜0.05）。miR-377低表达组患者的总生存率高于高表达组（P＜0.05）。索拉菲尼对miR-377过表达Huh7细胞活性具有明显的抑制作用（P＜0.05）。在线生物信息学分析结果和蛋白荧光素酶报告基因系统验证结果显示，miR-377直接靶向结合SIRT1基因；实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果表明，转染miR-377-mimics后Huh7细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平明显下调（P 值均＜0.05）。而共转染miR-377-mimics和pcDNA3.1-SIRT1后，SIRT1过表达能够明显减弱索拉菲尼对Huh7细胞增殖的抑制作用（P 值均＜0.05）。
结论：miR-377通过抑制SIRT1表达促进肝癌细胞对索拉菲尼的敏感性，可能为肝癌细胞索拉菲尼耐药的治疗提供一条新的思路。
[关键词]肝细胞癌；微RNAs；抗衰老酶1；索拉菲尼；抗药性，肿瘤
[ABSTRACT]
Objective: To investigate the regulation of microRNA（miR）-377 on 乙酰化酶 1（SIRT1）, and to explore the effect on the sensitivity of sorafenib.
Methods: The expression level of miR-377 was detected by real-time fluorescent quantitative PCR in 30 cases of hepatocellular carcinoma（HCC） and the corresponding adjacent tissues; The expression level of miR-377 in HCC Huh7 and HepG2 cells and normal human liver cells LO2（as the control） was detected by real-time fluorescent quantitative PCR. The Cancer Genome Atlas（TCGA） database bioinformatics was used to analyze the effect of miR-377 on the survival and prognosis of patients with HCC. Huh7 cells were transfected with miR-377-mimics by liposome, Huh7 cells were transfected with negative control（NC）-mimics as the control. The cell viability of Huh7 cells treated with different concentrations sorafenib was detected by MTT method. Starbase was used to analyze the target gene of miR-377, and luciferase reporter gene assay was used to verify whether miR-377 directly targets SIRT1 gene; The expression level of SIRT1 mRNA and protein in Huh7 cells after transfection with miR-377-mimics. After co-transfection of miR-377-mimics and recombinant plasmid pcDNA3.1-SIRT1, the Huh7 cells were treated with sorafenib, the proliferation was detected by MTT method and clone formation assay, respectively.
Results: The expression level of miR-377 in HCC tissues and cells was lower than that in normal liver tissues and LO2 cells, the difference was statistically significant（both P < 0.05）. The overall survival rate of the miR-377 low expression patient group was higher than that of the high expression group（P < 0.05）. Sorafenib could inhibite the activity of miR-377 overexpressed Huh7 cells（P < 0.05）. Bioinformatics analysis and luciferase reporter gene assay results showed that miR-377 could target SIRT1 gene. The real-time fluorescent quantitative PCR and Western blotting results showed that after transfection with miR-377-mimics, the expression level of SIRT1 mRNA and protein were significantly decreased（both P < 0.05）. After co-transfection of miR-377-mimics and pcDNA3.1-SIRT1（SIRT1 overexpression） could significantly reduce the inhibitory effect of sorafenib on the proliferation of Huh7 cells（both P < 0.05）.
Conclusion: MiR-377 can promote the sensitivity of HCC cells to sorafenib by inhibiting SIRT1 expression, and provide some ideas for the treatment of sorafenib resistance.
[Key words]Carcinoma, hepatocellular; MicroRNAs; 乙酰化酶 1; Sorafenib; Drug resistance, neoplasm
肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范围内与癌症相关死亡的第3大常见恶性肿瘤[1]。约85%的肝癌来自发展中国家，其中乙型肝炎病毒感染的地区发病率最高[2]。目前，肝癌的治疗主要是手术、放疗和化学疗法。当前的治疗方法是有限的，并且不能显著提高其生存率。因此，阐明肝癌发生和发展的分子机制，建立治疗肝癌的预后因素，具有十分重要的意义。
索拉非尼是一种口服多激酶抑制剂，可以抑制血管生成及肿瘤细胞的增殖[3]。另有研究报道，索拉非尼也可以靶向信号转导途径，包括细胞凋亡和细胞周期相关等的途径[4]。尽管索拉非尼已被确立为晚期HCC、肾细胞癌和甲状腺癌的有效药物，但是对索拉非尼有完全反应的HCC患者人数非常少[5]。考虑到新出现的肝癌索拉非尼耐药性危机，迫切需要对耐药性进行进一步的研究。非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA）最近已成为与HCC耐药有关的信号通路中的重要调节剂，因此药理靶向这些ncRNA可能是逆转耐药的一种新颖的策略[6]。
微RNA（microRNA，miRNA，miR）是一类短的、高度保守的内源非编码RNA（长度为18～22个核苷酸），通过与靶标信使的3’-非翻译区（3’-untranslated region，3’-UTR）结合而参与基因表达的转录后调控RNA[7]。大量事实和证据表明，特定的miRNA改变与HCC的发生、发展和复发有关[8]。此外，miRNA已被证明是解决不同癌症中化学耐药机制的有前途的新兴靶点[9]。研究表明，特定miRNA的表达与抗癌药物耐药性的发展有关[10]。当前研究表明，miR-377在HCC、骨肉瘤和胶质母细胞瘤中具有抑制细胞增殖和侵袭的作用[11-13]。然而，miR-377与索拉非尼敏感性的关系尚不清楚。
乙酰化酶属于哺乳动物沉默信息调节因子1家族，一些报告显示组蛋白去乙酰化酶1（乙酰化酶 1，SIRT1）的过度表达与癌症对化疗的抵抗有关[14]，其可能通过影响磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）途径和多药耐药相关蛋白1（multidrug resistance associated protein 1，MRP1）的表达促进肝癌细胞增殖并耐药[15]。然而，miRNA在肝癌中对索拉非尼反应的调控机制和治疗潜力尚不清楚。
因此，本研究的关键目标是了解索拉非尼在HCC细胞中的耐药性，并探究可以克服此问题的靶点。本研究中首先鉴定了一种肝细胞癌中的癌症相关调节物miR-377与索拉菲尼的敏感性有关，且miR-377通过下调SIRT1促进肝癌细胞对索拉非尼敏感性。基于此途径开发的调节剂可能为治疗肝癌索拉非尼耐药提供新的策略。
1 材料与方法
1.1
组织来源
收集中国医科大学附属肿瘤医院2017年9月—2019年9月手术切除的30对肝癌及癌旁组织标本。癌旁组织取材为距离肿瘤组织1 cm处，患者术前未进行放化疗治疗，所有癌及癌旁组织均经2名病理学医师评估确诊。本研究获得肿瘤医院伦理委员会批准，并经患者签署知情同意书后进行。
1.2
细胞、试剂及仪器
HCC细胞系Huh7和HepG2购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，DMEM培养液和胰蛋白酶购自美国Gibco公司，胎牛血清购自德国WALZ公司。TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司，实时荧光定量PCR试剂框GoTaq®qPCR Master和双荧光素酶报告分析系统均购自美国Promega公司。携带有miRNA-377-模拟物（miRNA-377-mimics）和阴性对照（negative control-mimics，NC-mimics）的重组质粒和携带有SIRT1全基因的重组质粒pcDNA3.1-SIRT1购自上海吉凯基因化学技术公司。兔抗人SIRT1和&β;-actin单克隆抗体（内参照）购自英国Abcam公司，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG（二抗）购自美国Proteintech公司。MTT试剂框和本甲磺酸索拉菲尼购自索莱宝生物科技有限公司，Annexin Ⅴ-FITC凋亡试剂框购自赛默飞生物科技有限公司，LipofectAMINE 3000购自上海锐赛生物技术有限公司。
日本尼康LV150N普通显微镜为北京新卓仪器有限公司产品，美国ABI Attune流式细胞仪购自上海艾研生物科技有限公司。
1.3
实时荧光定量PCR法检测肝癌组织及细胞中miRNA-377的表达水平
组织中RNA的提取：取适量组织，加入TRIzol试剂匀浆后，加入1/5体积氯仿萃取并离心取上层澄清液体，再加入等体积异丙醇－20 ℃静置过夜沉淀RNA；离心除去上清液取沉淀，用75%乙醇溶液洗涤沉淀后，将RNA溶解于除去RNAseA酶的去离子水中。细胞中RNA的提取：收集各株细胞，加入TRIzol试剂裂解细胞，其余流程同组织。
检测提取获得总RNA的浓度和纯度，利用GoScript反转录系统制备获得cDNA，之后使用Promega GoTaq® qPCR Master Mix行实时荧光定量PCR分析。引物序列：SIRT1基因上游引物序列为5’-TAGCCTTGTCAGATAA GGAAGGA-3’，下游引物序列为5’-ACAGCTTCACAGTCAACTTTGT-3’；&β;-actin基因（内参照）上游引物序列为5’-CATCCGTA AAGACCTCTATGCCAAC-3’，下游引物序列为5’-ATGGAGCCACCGATCCACA-3’。以2－&δ;&δ;Ct值表示目的基因的相对表达量。
1.4
细胞转染
将Huh7细胞用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、链霉素的DMEM培养液，置于37 ℃、CO2体积分数为5%的培养箱中培养，隔天传代。取对数生长期的Huh7细胞接种于6孔板中，细胞分为2组：NC-mimics转染组和miR-377-mimics转染组；其中NC-mimics正义链序列为5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反义链序列为5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’；miR-377-mimics正义链序列为5’-AGAGGUUGC CCUUGGUGAAUUC-3’，反义链序列为5’-AUUCACCAAGGGCAACCUCUUU-3’。采用LipofectAMINE 3000分别将携带有miRNA-377-mimics的重组质粒和NC-mimics的重组质粒转入细胞，转染流程参阅试剂框提供的操作说明，每组细胞设置6 个复孔。转入NC-mimics和miRNA-377-mimics后将Huh7细胞继续培养24 h，并用实时荧光定量PCR法检测转染效率，实验流程同1.3节。
1.5
MTT法检测索拉菲尼对miR-377过表达Huh7细胞活性的影响
细胞分组同1.4节，将细胞接种于96孔板中（5×103个/孔），待细胞生长至铺满培养板底部后，加入不同浓度的索拉菲尼（0、2、4、6、8和10 μmol/mL）处理24 h，每组设置6个复孔；药物处理结束后每孔加入MTT（5 mg/mL）继续培养4 h。除去上清液，每孔加入100 µL DMSO，摇床上振荡处理10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪波长490 nm处检定各孔的D值，并计算细胞存活率及半数抑制浓度（half-maximal inhibitory concentration，IC50）值。
1.6
荧光素酶报告实验检测miR-377与SIRT1基因的相关性
通过Starbase位点（starbase.sysu.edu.cn/）分析miR-377的相关靶基因，发现SSIRT1基因可能是miR-377的靶基因。
将Huh7细胞（1×105个）接种于24孔培养板中，培养于含有10%胎牛血清无抗生素的DMEM培养液中，24 h后采用脂质体转染法将NC-mimics、miR-377-mimics与携带有野生型SIRT1-3’-UTR和突变型SIRT1-3’-UTR的肾素荧光素酶报告质粒（由上海锐赛生物技术有限公司构建）两两组合后，共转染Huh7细胞，转染方法同1.4节。在正常条件下继续培养细胞24 h，收集各组细胞制备细胞裂解物，随后采用双荧光素酶报告分析系统测量荧光素酶活性。萤火虫荧光素酶活性被标准化为海肾荧光素酶活性。
1.7
实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-377过表达对SIRT1 mRNA及蛋白表达水平的影响
分别采用DMSO和索拉菲尼（10 μmol/mL）处理转入NC-mimics或miR-377-mimics的Huh7细胞24 h。收集各组细胞，用RIPA裂解液处理细胞，提取细胞总蛋白，通过使用BCA蛋白分析试剂框（美国Pierce Biotechnology公司产品）检测蛋白浓度。取适量蛋白行SDS-PAGE分离蛋白，并转移到PVDF膜上。用含5%牛血清白蛋白的封闭液封闭处理转移膜2 h，加入一抗[兔抗人SIRT1和&β;-actin单克隆抗体（体积稀释比例均为1∶1 000）]，4 ℃孵育过夜。次日用PBS冲洗膜3次，加入二抗[辣根过氧化物酶标记山羊抗鼠（体积稀释比例为1∶1 000）]室温孵育1 h。最后使用增强化学发光底物反应试剂框（美国Thermo Scientific公司产品）显影，分析各蛋白条带的灰度值。以目的蛋白条带与内参照&β;-actin蛋白条带灰度值之比表示目的蛋白的相对表达水平。
1.8
MTT法和克隆形成实验检测miR-377过表达同时上调SIRT1表达对Huh7细胞增殖能力的影响
收集对数生长期的Huh7细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液（含10%胎牛血清的DMEM培养液中备用）；取750个细胞接种在24孔板上，24 h后采用脂质体法分别将NC-mimics、miRNA-377-mimics和miRNA-377-mimics＋pcDNA3.1-SIRT1转入Huh7细胞，转染流程同1.4节。采用MTT法检测3组细胞的存活率，检测流程同1.5节。
克隆形成实验：用胰蛋白酶消化生长良好的Huh7细胞并接种于6孔板中（500个/孔），6 h待细胞贴壁后，将细胞分组：（1）未用任何药物处理，转入NC-mimimcs的Huh7细胞；（2）转入NC-mimimcs的Huh7细胞用索拉菲尼（10 μmol/mL）处理24 h；（3）仅转染miRNA-377-mimics的Huh7细胞；（4）同时转入miRNA-377-mimics和pcDNA3.1-SIRT1的Huh7细胞；将上述4组处理后的细胞置于37 ℃、CO2体积分数5%及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。除去上清液，用PBS洗涤细胞2次。加入4%多聚甲醛溶液固定细胞15min；除去固定液，加入结晶紫染色液染10～30 min，然后用流水缓慢洗去染色液。在低倍光学显微镜下计克隆数（＞50个细胞计为一个克隆），并计算克隆形成率；克隆形成率（%）＝克隆数/接种细胞数×100%。
1.9
统计学方法
应用SPSS 22.0统计学软件对所有的实验数据进行统计学处理。所有的实验均孤立重复3次，计量资料以 ¡À s表示。多组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用LSD-t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1
miR-377在HCC组织和细胞中低表达
采用实时荧光定量PCR法检测了30对HCC及其癌旁组织和HCC细胞中miR-377的表达水平。结果显示，HCC组织中miR-377的表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.05）（图1A）；人正常肝细胞LO2和肝癌Huh7、HepG2细胞中miR-377的相对表达量分别为1.05±0.12、0.48±0.18和0.65±0.13，提示miR-377在肝癌细胞中的表达水平明显低于人正常肝细胞，且miR-377在Huh7细胞中表达水平最低（图1B），因此后续选择Huh7细胞作为研究对象。
在线利用癌症和肿瘤基因图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库（http://www.oncolnc.org/）共收集获得506例HCC患者的资料，采用Kaplan-Meier法分析结果（图1C）显示，miR-377低表达患者组的总生存率明显高于高表达组，差异有统计学意义（P＜0. 05）。以上结果提示miR-377可能与HCC的发生和发展具有相关性。
2.2
miR-377过表达促进Huh7细胞对索拉菲尼的敏感性
实时荧光定量PCR法检测结果（图2A）显示，与NC-mimics组（对照组）相比，miR-377-mimics组Huh7细胞miR-377中的表达水平明显上调，为对照组的22.15倍（P＜0.05）；提示构建获得miR-377过表达的Huh7细胞。
采用MTT法检测不同浓度（2、4、6和8 μmol/mL）的索拉菲尼处理NC-mimics组（对照组）和miR-377-mimics组细胞24 h下的增殖情况。结果（图2B）显示，NC-mimics组细胞的增殖率分别为（98.0±1.2）%、（90.0±3.5）%、（75.0±4.5）%和（64.0±4.2）%，miR-377-mimics细胞的增殖率分别为（92.0±2.1）%、（75.0±4.2）%、（55.0±5.1）%、（40.0±3.7）%和（30.0±3.8）%；同一浓度组间差异均有统计学意义（P 值均＜0.05）。IC50值计算结果显示，索拉菲尼干预Huh7细胞24 h后，其对NC-mimics组细胞的IC50值为（8.5±0.38）μmol/mL，对miR-377-mimics组细胞的IC50值为（5.1±0.22）μmol/mL，差异有统计学意义（P＜0.01）。这一结果说明，过表达miR-377之后，能够明显提高肝癌细胞系Huh7对索拉菲尼的敏感性。
2.3
SIRT1与miR-37的相互作用
通过Starbase位点（starbase.sysu.edu.cn/）进行生物信息学分析后发现，SIRT1基因可能是miR-377的直接靶点（图3A）。SIRT1与miR-377在HCC中的相关性如图3B所示，二者具有一定的相关性。
进一步采用荧光素酶报告基因实验来验证miR-377是否直接靶向结合SIRT1。结果（图3C）显示，与NC-mimics＋野生型SIRT1-3’-UTR重组质粒组、NC-mimics＋突变型SIRT1-3’-UTR重组质粒组和miR-377-mimics＋突变型SIRT1-3’-UTR重组质粒组相比，仅有miR-377-mimics＋野生型SIRT1-3’-UTR重组质粒组的荧光素酶活性明显被降低（P＜0.05）。结合生物信息学分析结果，由此推测SIRT1基因是miR-377的直接靶点。
2.4
过表达miR-377抑制SIRT1的表达
分别用DMSO和索拉菲尼（10 μmol/mL）处理转入NC-mimics或miR-377-mimics的Huh7细胞24 h，分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平。
实时荧光定量PCR法检测结果（图4A）显示，无论用DMSO或是索拉菲尼（10 μmol/mL）处理后，与NC-mimics组相比，miR-377-mimics转染组中SIRT1 mRNA的表达水平均明显下调（P 值均＜0.05）。
采用蛋白质印迹法检测SIRT1蛋白的表达水平。结果（图4B）显示，用DMSO处理后NC-mimics组中SIRT1蛋白的表达量为1.332±0.12，miR-377-mimics转染组为0.801±0.103；索拉菲尼处理后NC-mimics组中SIRT1蛋白的表达量为1.291±0.12，miR-377-mimics转染组为0.911±0.114。与NC-mimics组相比，miR-377-mimics转染组中SIRT1 mRNA的表达水平均明显下调（P 值均＜0.05）。
上述结果说明，miR-377能够抑制SIRT1的表达，索拉菲尼处理后能进一步下调miR-377过表达导致的SIRT1表达的下调。
2.5
miR-377通过调控SIRT1影响HCC对索拉菲尼的敏感性
为了进一步验证miR-377是否通过调控SIRT1影响HCC对索拉菲尼的敏感性，本研究中将miR-377-mimics和携带有SIRT1全基因的重组质粒共同转染至肝癌Huh7细胞中。
MTT法检测结果（图5A）显示，在不同浓度（0、2、4、6和8μmol/mL）的索拉菲尼处理下，NC-mimics组Huh7细胞的存活率分别为（98.0±1.9）%、（87.0±3.5）%、（76.0±4.5）%、（64.0±4.2）%和（53.0±2.1）%；miR-377-mimics组Huh7细胞的存活率分别为（95.0±2.1）%、（74.0±3.2）%、（54.0±5.1）%、（42.0±3.7）%和（31.0±3.8）%；miR-377-mimics＋SIRT1组Huh7细胞的的存活率分别为（96.0±1.2）%、（81.0±4.1）%、（64.0±3.3）%、（51.0±6.5）%和（41.0±3.4）%；与miR-377-mimics组相比，同一索拉菲尼浓度下miR-377-mimics＋SIRT1组细胞的存活率均明显提高，差异有统计学意义（P＜0.05）。这一结果说明，上调SIRT1表达后能够逆转miR-377组导致的抑制Huh7细胞增殖的情况。
克隆形成实验检测结果（图5B）显示，NC-mimics组、索拉菲尼组、miR-377-mimics组和miR-377-mimics＋p-CDNA3.1-SIRT1组的克隆形成数分别是（412±21）个、（266±36）个、（291±14）个和（379±29）个。miR-377-mimics＋p-CDNA3.1-SIRT1组的细胞克隆数明显多于miR-377-mimics组，差异有统计学意义（P＜0.01）。上述结果进一步表明，miR-377能与SIRT1结合从而影响HCC细胞对索拉菲尼的敏感性。
3 讨 论
在HCC治疗中出现索拉非尼耐药是一个长期存在的临床问题，有报道提示，HCC患者中miR-17-92水平的升高可能会限制索拉非尼的抗癌功效，而靶向这些miRNA可以恢复HCC对索拉非尼的敏感性[16]，因此本研究中重点探讨了miR-377在HCC细胞获得性索拉非尼耐药中的作用。尽管在有关索拉非尼耐药性的许多研究中已经报道了失调的miRNA谱，但这些失调的 miRNA的靶基因仍然是未知的，有必要进一步的鉴定。
研究显示，SIRT1通过使蛋白质脱去乙酰基调节其转录能力或活性，从而影响细胞能量代谢以及应激反应途径[17]。晚期肝癌的少数全身治疗选择之一是多激酶抑制剂索拉非尼，但是其并不能在所有患者中获得成功的治疗。原因之一可能是NAD依赖性脱乙酰基酶SIRT1的异常表达，可能调节了肿瘤的耐药性[18]。研究表明，SIRT1过表达的HCC患者对索拉非尼的耐药性更高，与非SIRT1过表达的肿瘤相比，这些肿瘤患者的预后较差[19]。同时有研究显示，SIRT1表达的调节可明显影响PI3K途径和MRP1的表达从而发挥耐药作用[15]。本研究中通过在线数据库预测和荧光素酶报告基因证明了SIRT1与miR-377具有结合作用，因此靶向结合SIRT1可作为提高化疗药效的一种治疗策略。
本研究结果提示，与正常组织或细胞相比，肝癌组织或细胞中miR-377表达降低。miR-377过表达会增加HCC对索拉非尼的敏感性。此外，SIRT1是miR-377靶基因，miR-377过表达可明显抑制SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平，同时过表达miR-377和SIRT1下调提高了HCC细胞对索拉菲尼的敏感性；而共转染miR-377-mimics和携带有SIRT1全基因的重组质粒后，可相对降低HCC细胞对索拉菲尼的敏感性。表明miR-377通过对SIRT1蛋白表达水平的调控改变了HCC细胞对索拉非尼的敏感性。
综上所述，本研究表明miR-377通过抑制SIRT1表达促进了肝癌细胞对索拉菲尼的敏感性，以期为降低肝癌细胞索拉菲尼耐药的临床治疗提供一定的研究数据。
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